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聚合酶链式反应(PCR)实验

2019.3.27
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

PCR是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法。其特异性是由两个人工合成的引物序列决定的。所谓引物就是与待扩增DNA片段两翼互补的寡聚核苷酸,其本质是ssDNA片段。待扩增DNA模版加热变性后,两引物分别与两条DNA的两翼序列特异复性。此时,两引物的3'端相对,5'向背。在合适的条件下,由Taq DNA聚合酶催化引物引导的DNA合成,既引物的延伸。上述过程是由温度控制。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环。PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。理论上扩增产物量成指数上升

实验材料

DNA

试剂、试剂盒

MgCl2DNA聚合酶BufferdNTP

仪器、耗材

毛细管薄壁离心管PCR扩增仪琼脂糖电泳

实验步骤

1、 反应体系:

 

(反应溶液可置于毛细管或薄壁离心管中扩增)


2、操作过程:(所用仪器为AMP1605热循环PCR扩增仪


预变性:94 ℃ 90秒


循环过程:94 ℃ 1秒 48 ℃ 1秒 72 ℃ 40秒  40个循环


延伸:72 ℃ 5分钟


3、检测:琼脂糖电泳检测。


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