实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 1 ~30 mg/ml 的抗体在 4℃对 0.1 mol/l NaHCO3 / 0.5 mol/l NaCl透析 24 h,期间换液3次。透析液的体积应500倍于抗体溶液。
3. 取小份上清测A280确定抗体的浓度。用0.1 mol/l NaHCO3 / 0.5 mol/l NaCl稀释抗体至5 mg/ml,于4℃保存。测此溶液的A280。
5. 用Whatman 1号滤纸、布氏漏斗、Erlenmeyer三角抽滤瓶并将之连接到水泵上组装 一套过滤装置,以10倍体积的水洗Sepharose
8. 按步骤5快速过滤Sepharose,抽气至半干状(即抽至成块状的Sepharose干裂,并失去光泽)。
11. 立即将称量好的Sepharose移至一烧杯,加入溶解于0.1 mol/l NaHCO3 / 0.5 mol/l NaCl中的等体积抗体溶液。用磁力搅拌器室温搅拌2 h 或4℃过夜。
12. 加入50 mmol/l 的pH8.0的甘氨酸(或乙醇胺)溶液,以饱和Sepharose上的剩余活性基团,并让胶浆沉降。吸出部分上清,离心去残余Sepharose后,测其A280,并与步骤2测出的抗体溶液的浓度比校,以确定偶联效率。 |