常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——电泳

一、垂直电泳

如果进行垂直电泳，按说明书先在电泳槽的下槽中装入电极缓冲液。将聚合后的凝胶连同玻璃板一起放入电泳槽中，在上槽中注入电极缓冲液，打开冷却循环系统，连接电源。一般起始电压约为 70~80V，然后不断升高。起始电流可设置为 20~30 mA，取决于凝胶的厚度，大小和样品数。在电泳过程中，应记录电参数的变化，以便以后重复。一般垂直电泳需要 2~6 小时，取决于凝胶孔径，特别是缓冲系统和电参数的选择。

待溴酚蓝前沿到达电泳槽底部（阳极）时，切断电源，关掉冷却循环系统。取出凝胶，准备染色。

二、水平电泳

目前有三种方式进行水平电泳。一是搭接滤纸桥，这是最经典的方式。二是使用半干技术，即用凝胶条或滤纸块的方法。经典方法的操作比较麻烦，电泳时间一般需要 2~4 小时。使用半干技术，操作简便，电泳时间只需 0.5~1 小时左右，并且不影响分辨率。

1. 先将电极缓冲液加在电泳槽两侧的缓冲液槽中，打开冷却循环系统，调节温度在 4~12℃。视室温而定。室温低时，设置较低的温度。反之，室温高时或样品中有尿素时，设置较高的温度。

2. 在冷却板上铺一层煤油或液体石蜡（冬天因液体石蜡太黏稠，不宜使用)，再铺凝胶，并赶出其间的气泡。使凝胶和冷却板有很好的接触，以排除电泳过程中在凝胶上产生的热。

3. 用电极缓冲液浸泡 8~10 层滤纸电极芯，并确保滤纸之间没有气泡。将泡好的电极芯与凝胶搭接，至少重叠 1 cm。为了在凝胶上两电极之间得到均匀的电压梯度，使电泳区带平直，两侧电极芯与凝胶搭接的边缘必须严格平行。电极芯的另一端悬在电极缓冲液中。



4. 打开电源，开始预电泳，以去除凝胶中的不纯物质。预电泳时间一般为 20 分钟，时间过长会产生电解产物。

5. 加样可直接滴加在凝胶表面（不多于 3 μl )，或滴加在加样孔中，或加在合适孔径的滤纸块上。加样后，进行 5~10 分钟的低电压，低电流电泳（原电压和电流的 1/5 到 1/2 )，以使蛋白质分子顺利地进入凝胶。

6. 电泳时按说明书选择合适的电压，电流和功率参数，阳极电泳时，待溴酚蓝前沿接近阳极（阴极电泳时，待指示剂前沿接近阴极）后，关掉电源，停止电泳，准备染色。