电泳技术RNA电泳操作步骤

　　试剂：

　　琼脂糖（Agarose）、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。

　　步骤

　　一 、5 x MOPS-EDTA Buffer的配制（0.1 M MOPS pH7； 5mM EDTA； 10mM NaAc）

　　1. 称量20.9g的MOPS，置于1L烧杯中。

　　2. 加700mL DEPC水溶解。

　　3. 用2N NaOH调节pH**7.0

　　4. 在上述溶液中加入10mL的1M的NaAC

　　5. 溶液中加入10mL的0.5M的EDTA pH=8.0

　　6. 加DEPC水定容**1L

　　7. 用0.45um滤膜过滤后避光保存

　　二、RNA样品处理方法

　　混合均匀后，70°C加热5min，迅速冷却**室温。（PCR仪操作）

　　三、甲醛变性琼脂糖凝胶的制备

　　加1g琼脂糖到31mL DEPC水中，另加10mL 5 x MOPS-EDTA Buffer煮沸溶解。加入DEPC水定容**41mL。将溶液冷却**60°C左右，加入9mL 37%甲醛，倒入胶槽中静置1小时。（胶中加入EB染料）

　　四 电泳

　　混匀电泳槽中的1 x MOPS-EDTA Buffer电泳液，加样，10v/cm条件下电泳约1小时。电泳期间每隔15min混匀电泳槽中的电泳液一次。