PEGIPTG

培养箱离心机

1.  制备从M13噬菌体mGP1-2原种，加PEG溶液沉淀浓缩噬菌体。重悬噬菌体于M9培养基，滴定其滴度。

2.  将由“基本方案”步骤1所得的含T7 启动子表达质粒转化M13许可性大肠杆菌细胞，转化物涂布于氨苄青霉素平皿上，37℃培养过夜。挑取独立转化菌落，接种于LB/氨苄青霉素培养基中，37℃温育过夜。 

3.  将过夜培养物以1：100比例稀释于LB/氨苄青霉素培养基中，37℃缓缓振荡培养至OD₅₉₀≈0.5（避免剧烈振荡）。

4.  从步骤1得到的M13噬菌体mGP1-2以每细胞感染约10个噬菌体的量，感染大肠杆菌，加100 mmol/l IPTG至终浓度为1 mmol/l，诱导T7 RNA聚合酶表达。37 ℃下温育细胞2 h。

5.  通SDS-聚丙烯酰胺电泳分析诱导产生的蛋白。将相当于1.0 ml 培养液中的细胞重悬于0.1 ml 裂解缓沖液中，100℃加热5 min 后，立即将各样本以每份20 μl 的量加到SDS-聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。可取10 μl 细胞制备适当的细胞提取物检测诱导后的酶活性。

6.  收获细胞并分析产生的诱导蛋白。