从培养的哺乳动物细胞中分离高尔基体

粗匀浆液

塑料离心管

1. 向 6 ml 的粗匀浆液中（细胞收获后以大约 5X10⁵ /ml 悬于 0.25 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 中），加入 6 ml 含有 10  mmol/L pH 7.4 Tris-HCl 的冰浴的 2.3 mol/L 蔗糖，将蔗糖浓度调整到 1.4 mol/L。

2. 加入 100 mmol/L 的 Na₂EDTA 母液并混合使终浓度为 1 mmol/L。

3. 将混合物加入到一只干净的 SW27 塑料离心管中（例如 polyallomer)，然后用 14 ml 的 1.2 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 覆盖，再加入 9 ml 的 0.8 mol/L 蔗糖-10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.4)。

4. 将梯度溶液在 SW27 转头中以 25000 r/min ( 90000 g) 离心 2.5 小时。

5. 用巴斯德吸管或用注射针头以最小的体积回收位于 0.8 mol/L/1.2 mol/L 蔗糖界面处的混浊带，然后可以将膜成分离心沉淀出来。