肌组织细胞培养实验——骨骼肌细胞培养实验

Hanks胰蛋白酶血清胎汁

纱布

动物胚或幼体的大腿肌组织为最好的培养材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠（Wistar 大鼠更好）。

1.  杀死动物，无菌取大腿肌组织，切成0.3~0.5 厘米小块；

2.  用不含钙镁离子的Hanks液配的0.25 %胰蛋白酶消化，无菌纱网或纱布滤过，合成培养基加10 %小牛（或马）血清培养，为促进分分蘖节经可加1 %的胎汁；

3.  细胞接各量为2×10⁶ /皿；接种在胶原或明胶的底物上能促进细胞分化。明胶制备比较简单，常用Hanks液配的0.01 %明胶。

细胞接种率约为50 %；细胞生长开始呈纺锤形，培养50~52 小时后将出现融合形成肌细胞状多核纤维。数日后融合停止，此时能观察到横纹。一般在融合后二三天内能见到收缩现象；因收缩运动有时可导致细胞从底物脱离。在初代培养时，如发现成肌细胞（Myoblast）所占比例很少时，根据成肌细胞比非成肌细胞贴壁慢的特点，可采用胰蛋白酶消化后反复贴壁法，淘汰掉非肌细胞成分。骨骼肌细胞可进行传代培养，使之成为有限细胞系；但易失去分化现象；表现为成肌细胞不发生融合，从而不能形成多核肌纤维和出现收缩现象，只有培养条件良好时，才可发生肌细胞收缩变化。