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正常细胞常规核型的标本制备_肿瘤细胞染色体标本制备

2019.4.03
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

实验方法原理

利用肿瘤细胞无限繁殖的特点,掌握其体外生长动态,取处于对数生长期的细胞便可获得丰富的分裂相。肿瘤细胞染色体异常包括两个方面:1.  结构异常  即在肿瘤细胞常出现的染色体畸变,包括双着丝点染色体、环状染色体、断裂的染色体、染色体裂隙及微小体等。2.  数目异常  由于肿瘤细胞分裂失去应有的调控,可出现亚二倍体、超二倍体和多一倍体数目异常现象。肿瘤细胞染色体制备技术在细胞生物学、医学遗传学的基础研究和临床诊断、愈后观察等方面均有广泛用途。

实验材料

HL—60细胞HeLa细胞

试剂、试剂盒

640培养液肝素溶液秋水仙素胰蛋白酶EDTAPHAKCl甲醇冰醋酸Giemsa原液磷酸缓冲液生理盐水

仪器、耗材

超净台镊子离心机水浴箱天平离心管显微镜载玻片平皿

实验步骤

1.  以1.6x 105个/ml 细胞浓度将FL-60细胞接种于培养瓶内。

2.  48小时后以终浓度为0.04ug/ml 的秋水仙素处理2.5小时,移入10 ml 离心管。

3.  其余步骤与淋巴细胞染色体制备相同。


4.  将长成单层的HeLa细胞按1:2传代进行培养,36小时后用终浓度为0.04 ug/ml 的秋水仙素处理3小时。

5.  按时终止培养,用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA混合消化液处理单层细胞,待细胞收缩变圆时,弃去消化液。

6.  加入少许低渗液将细胞从瓶壁洗脱,移入10 ml 离心管,加入预热37℃的低渗液至5~6 ml,在37℃处理25分钟。

7.  以下步骤同淋巴细胞染色体核型制备。


8.  结果:计数HeLa细胞和HL-60细胞的染色体数并寻找是否有畸变的染色体。

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