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培养细胞标记和裂解物的制备实验——SDS煮沸法

2019.4.05
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身
实验材料

培养细胞

试剂、试剂盒

SDS裂解液RIPA校正液免疫沉淀洗液

仪器、耗材

离心机培养箱玻璃培养管

实验步骤

1.  标记和洗涤细胞（温和去污裂解法，步骤1~7）。

 

2a.  对于贴壁细胞：加入适量SDS裂解液至培养皿中。（35 mm 培养皿加0.1 ml，50 mm 培养皿0.25 ml，100 ml 培养皿0.5 ml）立即用橡皮细胞刮于刮下细胞并转移至带螺口盖的微量离心管中。

2b.  对于非贴壁细胞：在旋涡混合器上短暂振荡细胞沉淀使之松散，加入1 ml SDS裂解缓冲液（毎5×107细胞）后，再次振荡。

3.  煮沸2~5 min，加入4体积的RIPA正液，充分混匀。

 

4.  于4℃以26 000 g 离心90 min 或在冷冻离心机上以最大速度离心以回收细胞裂解物。

 

5.  如常进行免疫沉淀分析，并用免疫沉淀洗液进行洗涤。

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