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蛋白质磷酸化—X射线片放射自显影检测32P标记的蛋白质

2019.4.05
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身
实验材料

样品

试剂、试剂盒

凝胶

仪器、耗材

Whatman 3MM 滤纸

实验步骤

1. 单向或双向凝胶电泳分辨 32P 标记的样品。

2. Whatman 3MM 滤纸上或者两张塞璐玢膜（Bio-Rad) 之间吸干凝胶。用放射性墨水在凝胶边缘标几个点。

3. 完全黑暗或安全光（用柯达 GBX-2 或 6B 滤光片遮光）下，在 X 射线片曝光夹里，将柯达 X-OMAT-AR 胶片放在凝胶与增感屏（DuPont Cnone) 之间。确保胶片与凝胶及增感屏的闪烁体面紧密接触。如果用到第二块增感屏，应将它放在凝胶的另一面，让凝胶与胶片夹在两块增感屏之间。用两块塑料板夹紧曝光夹，于 -70℃ 曝光。

4. 冲洗 X 射线片，显影。

5. 依放射性记号，在读片机里将考马斯亮蓝染色胶与放射自显影图排列好，鉴定磷酸化靶蛋白，拍照。

6. 切下含靶蛋白的胶条，用液闪计数器检测磷酸化蛋白的放射性。

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