条件培养基的制备

条件细胞

克隆用培养基除菌滤器

1. 条件细胞（条件细胞：同一种细胞、其他细胞系（如，3T 3 细胞），或小鼠胚胎成纤维细胞）生长至 50 % 汇合。

2. 更换培养基，继续培养 48 h 。

3. 收集培养基。

4. 离心，1000 g，10 min。

5. 0.45 μm 无菌过滤器（除菌滤器：0.45 μm 或0.22 μm ，过滤瓶）过滤（培养基可以先经过 5 μm 和 1.2 μm 过滤器预先过滤)。

6. 将条件培养基（克隆用培养基：Ham’s F12，加 10 % FBS 或适合待克隆细胞的培养基） -20°C 保存。

7. 用前解冻，按照如下比例加在克隆培养用培养基中：1 份条件培养基加 2 份克隆培养用培养基。

离心、冻存、解冻、过滤，这些步骤都有助于避免从原培养瓶中携带细胞。如果克隆培养的细胞与条件细胞是同一种细胞，这个问题就轻一点。但是用不同细胞系或原代小鼠成纤维细胞作为条件细胞可能更有利于克隆培养。如果用这种方法建立细胞株，细胞的性质必须经过鉴定（见方案 16. 10、方案 16. 11、方案 16. 12)，排除因条件培养基而引起的细胞交叉污染。