实验方法原理 | 利用标记技术将酶标记到抗体(抗原)上,使待检物中相应的抗原(抗体)与酶标记抗体(抗原)发生特异性反应。在遇到相应的酶底物时,酶能高效、专一催化、分解底物,生成有颜色的产物。根据颜色的深、浅、可以判断待检物中有无特异的抗原(抗体)以及量的大小。该方法可对待检样品进行定性和定量分析;同时具有微量、特异、高效、经济、简便等优点,因此是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。 目前使用的酶联免疫检测方法很多,其种类按检测目的可分为: 间接法——用于测定抗体 双抗体夹心法——主要用于测定大分子抗原 竞争抑制法——主要用于测定小分子抗原 本实验以血清 IgE 的检测为例学习双抗体夹心法。 ELISA 的原理图
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 包被酶标反应板 2. 封闭 3. 待检血清 4. 酶标记抗体 5. 底物 6. 终止液
7. 于 20 min 内,用酶标仪测定各孔OD 值,测定波长495 nm。 展开 |
注意事项 | 1. 实验时应分别设阳性对照与阴性对照孔,每一待检样品应平行作两份,以保证实验结果的准确性。 2. 实验时,用羊血清、兔血清或BSA 封闭以防止非特异性反应的发生。 |
其他 | 一、实验结果 用待测标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均吸收值的比值(P/N)表示,当P/N 大于某一数值时(如2.1)判断为阳性,数值的大小依具体检测要求而定。 |