白细胞介素-6生物学活性检测

7TD1细胞系

RPMI16403H-TdRPPOPOPOP二甲苯

滤纸培养板收集仪CO2孵箱计数仪

1.  IL-6依赖的7TD1细胞用无FCS的RPMI1640洗涤2 次每次1000 rpm，5 min，除去原培养液中的IL-6

2.  用10 ％FCS-RPMI1640调整活细胞数2×10⁴ /ml

3.  96 孔平底培养板中每孔加100 μl 7TD1悬液（2×10³ /孔）

4.  加入不同稀释度标准IL-6和待检样品（100 μl/孔）

5.  37 ℃，5 ％CO₂孵箱培养48～72 h

6.  每孔加³H-TdR 0.5 μCi/50 μl，10 h

7.  用多头细胞收集仪收获于玻璃纤维滤纸上

8.  干燥后移入液闪瓶中，加入1 ml闪烁液，于液闪仪中测β射线的cpm值。

　
9.  计算

　
（1）根据cpm值，将能使7TD1细胞³H-TdR掺入cpm值达到最大值50 ％的IL-6的活性定为1 u/ml。

　　
（2）以刺激指数（SI）表示。

1.  7TD1细胞洗涤要充分、轻柔，每次弃洗涤上清力求彻底。

　　
2.  避免同位素污染。

　　
3.  加样品时，应从低浓度到高浓度顺序加。

　　
4.  加入³H-TdR最适时机是阴性对照95 ％以上死亡。

　　
5.  为了增加检测方法的敏感性，可采用新复苏7TD1细胞，或用pH4.0枸椽酸缓冲液处理培养状态的7TD1细胞。