动脉的基因转移实验——用外科方法将基因转入到颈动脉

氯胺酮甲苯噻嗪普通盐水乳酸盐保护液M-199培养基恩氟沙星25 和 33G 注射器

外科显微切割显微镜外科手术刀片Agricola显微切割牵引机便携灼烧装置26mm 直的微血管夹毛细血管磁夹6- 0丝缝合显微注射器显微切割剪硅酮插入导管Nexabond 经典皮肤复合系统温暖的小鼠笼

1.用 25 G 的注射器通过肌肉注射麻醉一只成年的 C57B1/6 小鼠，每千克 80 mg 氯胺酮和 12 mg 甲苯噻嗪。准备好将小鼠盖上布单，将小鼠仰卧放置在显微切割显微镜下确保能看得足够清楚。

2.在前部靠颈部的正中位置做一条线，用一把 15 号的手术刀从环状软骨切开一直切到垂管。切开 strap 肌肉并用 Agricola 显微切割拉伸机横向拉开。通过这样的切割，用钝圆的解剖方法将动脉管分开，保护迷走神经和喉部的回归神经。

3.电凝小的旁边的分支，如果有的话，在离主动脉至少 Imm 的地方放一个可移动的灼烧装置。不时地用普通盐水使周围组织湿润。如果不结扎所有的旁边的分支将导致载体溶液漏出，这可能会降低转基因表达。

对于颈总动脉注射

4a.用一个 26 mm 的 Schwarz 微管直夹在分叉处的近侧 7~8 mm 处夹住颈总动脉。用另外一个微管夹在分叉处的远端 2?3 mm 处从内外两侧夹住颈总动脉。

5a.用一个 6-0 的丝质缝合线在颈总动脉的近侧 1mm 处环绕，打一个顺的小结。

6a.用一个 33 G 的针头在颈总动脉的分叉处近侧 1mm 位置穿刺。用沾过乳酸盐保护溶液的棉签轻轻地挤压动脉使血液从穿刺口放出来。

7a.在颈动脉的穿刺位置重新插人一个 33 G 的针头，针头连在一个装有 10ul 病毒或非病毒载体溶液的显微注射吸管上。将溶液轻轻地慢慢地注人到血管中。

8a.拉紧开始放置的 6-0 丝质缝合线同时拨出针头（缝合线和穿刺应该是在同一个位置这样拉紧缝合线可以封住穿刺口）。20 min 后再来处理注人了载体溶液的血管。

9a.去掉双侧的夹子让血流重新流动到绑住的颈动脉的远端。进入到第 10 步。

对于流过颈总动脉的情况

4b.用一个 26 mm 的 Schwarz 微管直夹在分叉处的近侧 7~8 mm 处夹住颈总动脉。用一个 7-0prolenne 缝合线在颈分叉远侧处堵塞。用一个 7-0 prolenne 缝合线在颈总动脉分叉远端 2~3 mm 处堵塞外侧颈总动脉。

5b.用显微解剖剪在动脉近段外侧实施动脉切割。在近段外侧的切开位置插入一根二甲硅油导管并将导管近段分叉方向推动 1 mm。注射 20?20jul 的 M-199 中介液冲洗这个区段的血液，然后拿出导管。

6b.将另外一根连到显微注射吸管的导管插入，穿过切开位置在靠近分支的远端插入颈总动脉，显微吸管的尖端充满了病毒或非病毒载体。用一个刚好放置在切开位置远端的结来固定导管的尖端（这样将颈总动脉一段 3?4 mm 的部分分离开）。输入 4~5ul 的载体溶液到颈总动脉。让动脉膨胀 20 min。

7b.将载体溶液吸回到吸管然后将导管撤离。短时间地松开在颈总动脉上的夹子让残留在切开部分的载体溶液被冲走。

8b.将用来固定导管的结往近段移动，然后将外侧颈动脉在其原始位置打结。

9b.松开内侧颈动脉的结和颈总动脉上的结使血流恢复。

10.用 8-0 连续性的可吸收材料的缝合线将皮下筋膜层缝合。用经典的皮肤缝合系统或者 6-0 可吸收材料缝合线缝合皮肤。

11.术后皮下给药恩氟沙星（2.5 mg/kg) 和乳酸盐的保护溶液。让老鼠在温暖的笼子里恢复。