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动脉的基因转移实验

2020.8.24
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

实验材料 幼年家猪性别任意病毒或非病毒的包含编码重组基因的载体

试剂、试剂盒 阿斯匹林Telazol甲苯噻嗪异氟烷无菌的磷酸盐缓冲溶液

仪器、耗材 导管(适合猪用的)和器械标准的手术器械Balfour牵引器丝带两个气囊导管压力牵引器血液动力监护仪可吸收的缝线皮肤锁环

实验步骤

1.在手术前 2 天,给幼年家猪按 10mg/kg 体重的剂量服用阿斯匹林,并且在整个研究过程中每周一次连续服用 3 次。


2.按每公斤 6.0 mg Teiazol 和 2.2 mg 甲苯噻嗪(Xylazine) 的量给家猪进行肌肉注射来麻醉,然后插人一根导管,用异氟烷(isofhrane) 来麻醉,直到整个手术完成。


3.将实验用的家猪准备好,然后用一块布将其盖住,划一条中位线,从它的腹部切开,一直延伸到耻骨。就这样,把猪的表皮和筋膜沿中线切开了。如果是母猪的话,要避免切到它的尿道。从中打开一个空洞,小心地使用牵引器将它的肠放入体内。


4.用各种各样的器械,将从其头盖骨附近到大腿骨的的动脉血管分离出来。小心地将血管附近的淋巴和附近黏附的组织分开。从水平的角度将血管分离,以避免切到旁边的支血管。


5.小心分离后,用 2-0 的丝线将分支血管绑好。如果不这样的话,会降低血管中的血压,以至于影响到基因的转移。


6.把髂骨的尾部用 2-0 的丝绳绑好,用一把精致的剪刀在髂骨的动脉切一个口子,小心地用剪刀将血管扩张,插入一对气囊导管(图 13.1.1)。


>第 7~9 步是为了诱导血管手术的进行,如果是转基因到普通的血管,直接跳到第 10 步


7.通过目视镜,进一步地将导管接近气囊的尾部。这个操作需要通过微小的牵引将导管变直。


8.把管内无菌 PBS 装在压力转换器中,将它的压力调为0并且与球的尾部相连接。按 lcc/1~5 min 的速率在球中不断地充气(缓慢的充气是为了保护受伤的地方。这时压力表的压力大约为 500 mmHg。


9.导管的中部,两个气囊跨过受伤的血管的地方,将导管慢慢地缩小。


10.在气囊的尾部充人 1cc 的空气,加人 3~5 ml 的无菌 PBS,将血液冲走。


11.在导管(0.8 ml) 中加满病毒或非病毒的载体液体或者转入基因的细胞混悬液。


12.在气囊中充入 Iml 的空气。


13.在两个气囊之间(0.1~0.3 ml) 血管的伤口处的区域滴满悬液,测量滴入时的压力,不要超过 150 mmHg(猪的血压是 901 mmHg)。整个滴入过程为 20 min,其间要控制住压力。


14.从近到远,对气囊放气。把导管移开,并用 2-0 的丝绳绑好髂骨的动脉。确保血液的流动正常。


15.用 1-0 可吸收的缝线将猪的血管和肌肉缝合,再将筋膜缝合,最后将表皮缝合。


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