实验方法原理 | 非程序DNA合成(Unscheduled DNA Synthesis:UDS)即S期外的DNA合成。 在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期,但当处于非S期细胞DNA受损伤时,随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象,即UDS。 在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时,也诱导DNA出现UDS现象。 因此,UDS是检测环境致突变物、致癌物的短期测试方法之一。 如被检物具有致突或致癌性,当把同位素标记的DNA前体物加入培养环境中,受损DNA仍能在DNA 合成期外,以半保留复制的方式把DNA前体掺入到DNA链中,遂可应用同位素技术检测出来。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
实验步骤 | 以人二倍体成纤维细胞W1 38 为例 一、实验组合 为证实被检物作用的确切性,应做如下实验组合安排 二、放射自显影法UDS 的测定 1. 细胞培养
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注意事项 | 一、影响UDS的因素 1. 本底
(6)放射化学杂质; 为控制本底,除减少或消除上述因素的影响外,值得注意的是,羟基脲用量过大时也会抑制UDS,并有干扰待检物的作用。因此,应根据不同细胞选择羟基脲的浓度和作用时间,至少使已知阳性致癌物作用能在羟基脲抑制本底水严时显示出来。
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其他 | 一、UDS实验需用适宜细胞,能表达UDS指示的理想细胞应该具有
二、结果评价 UDS反映致癌物对细胞的损伤和DNA修复,可用于检测和筛选环境致癌物,有人检测化学物的致癌性,结果证明灵敏度为68%,附合性为69.1%。因此UDS是快速、敏感筛选环境诱变和致癌物方法之一。UDS水平即DNA 修复性计算是以每次实验105细胞中实验组和各对照组掺入3H-TdR dpm 之比。 展开 |