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磷酸盐缓冲液六偶氮化新品红苏木素氨水洗液
一、实验试剂:(一)底物混合液(1)0.067mol/L 磷酸盐缓冲液(PH7.6)(2)六偶氮化新品红(hexoliaed new fuchsin)溶液(新鲜配制)①溶解新品红(new fuchisn)1g于2mol/L盐酸液25ml中,溶液可长期保存。②40g/L亚硝酸钠溶液,4℃保存,每周必须新鲜配制,使用前将等体积新品红溶液和40g/L亚硝酸钠溶液混合,反应1min此液好为六偶氮化新品红③氯乙酸萘酚AS-D液:取氯乙酸萘酚AS-D(naphthol AS-D hcloroacetate)5mg溶于N,N-二甲基酰胺N,N-dimeth for mamide)2.5ml中。④将氯化萘酚AS-D溶液2.5ml和六偶氮化新品红0.25ml加至0.067mol/L磷酸盐缓冲液47.5ml中测PH值并调节至7.4不需要即可使用。(二)复染液:取harris苏木素(含少量明矾)复染液100ml,加冰乙酸4ml,混匀。(三)稀氨水洗液:每100ml蒸馏水中加入浓氨水(28%)0.2-0.3ml混匀。二、 实验操作:1. 将己固定好的血片或骨髓片放入底物混合液中,在高温温1育10min后,用流水冲洗.2. 用复染液复染10min3. 用稀氨水洗液冲洗玻片直至颜色由红变蓝4. 迅速用流水冲洗,空气中干燥后油镜检查。三、 实验结果判定:阳性反应为红色颗粒.定位于胞浆中,
l. 氯乙酸萘酚酯酸(NCE)最佳反应PH7.O-7.6之间,它不被氟化钠所抑制.2. 严格遵照操作规程,如增加温度和PH值可导致氯化乙酸萘酚分解,从而在细胞内产生明显的非特异性酯酶反应。3. 除本法采用新品红(new fachsin)外还有人选用坚固紫(fast garnet,GBC)或坚固蓝(fast blue ,BBN)