实验概要
小鼠神经干细胞分化为神经元
主要试剂
无菌水、DPBS、0.05%胰蛋白酶胰蛋白酶、细胞基础培养液、 PDL、laminin、小鼠神经分化培养液(Neuron M)
主要设备
4孔板、12mm细胞培养玻片
实验步骤
① 在4孔板每个孔中放置一块12mm细胞培养玻片,每孔加入100ug/mL的PDL500μL,室温静置过夜。
② 吸去PDL,用无菌水冲洗玻片,室温静置晾干;每孔加入10ug/mL的laminin500μL,37℃、5%CO2静置过夜。
③ 将小鼠神经干细胞以0.05%的胰蛋白酶消化2 min,以等体积的10%FBS终止,1000 rpm离心5 min,弃上清并用Neuron M重悬细胞,以细胞密度为1×104个/ml接种于弃除laminin的四孔板。
④ 每隔2天半量更换Neuron M,到第21天时,分化完成,可在镜下观察到神经元细胞与神经丝。