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微量柱法纯化DNA片段

2019.4.18
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184****5725

致力于为分析测试行业奉献终身

实验概要

目的DNA片段的回收技术是重组DNA中的关键技术,回收是指从电泳介质中纯化出目的片断。目前待回收的片断主要有酶切片断和各种PCR片断;回收的介质主要有琼脂糖和PAGE;回收的方法主要有树脂回收、微量柱回收、玻璃奶回收、液氮冻冻融回收及透析袋大量回收等,下面分别介绍树脂、微量柱及液氮冻冻融回收技术。本方法具有操作简单的特点,特别适合于PCR片段、酶切片段等的回收。

主要试剂

PCR片断纯化试剂盒  80%异丙醇  微量柱

主要设备

离心机  电泳议  电泳槽  取液器  微量真空装置  抽滤装置

实验步骤

1. 紫外灯下从胶上切下目的片段,放入一Epphendof管中。

2. 离心管在-20℃冷却5-10分钟。

3. 将微量柱下套上一Epphendof管,将冷却的胶条装进微量柱中,4℃ 12000rpm离心10分钟。

4. 弃微量柱,用酚/氯仿、氯仿抽提Epphendof管中液体各一次。

5. 1/10体积乙酸钠+2体积无水乙醇沉淀2小时。

6. 70%乙醇洗沉淀,真空干燥,复溶于dd水或TE中。


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