实验概要
目的DNA片段的回收技术是重组DNA中的关键技术,回收是指从电泳介质中纯化出目的片断。目前待回收的片断主要有酶切片断和各种PCR片断;回收的介质主要有琼脂糖和PAGE;回收的方法主要有树脂回收、微量柱回收、玻璃奶回收、液氮冻冻融回收及透析袋大量回收等,下面分别介绍树脂、微量柱及液氮冻冻融回收技术。本方法具有操作简单的特点,特别适合于PCR片段、酶切片段等的回收。
主要试剂
PCR片断纯化试剂盒 80%异丙醇 微量柱
主要设备
离心机 电泳议 电泳槽 取液器 微量真空装置 抽滤装置
实验步骤
1. 紫外灯下从胶上切下目的片段,放入一Epphendof管中。
2. 离心管在-20℃冷却5-10分钟。
3. 将微量柱下套上一Epphendof管,将冷却的胶条装进微量柱中,4℃ 12000rpm离心10分钟。
4. 弃微量柱,用酚/氯仿、氯仿抽提Epphendof管中液体各一次。
5. 1/10体积乙酸钠+2体积无水乙醇沉淀2小时。
6. 70%乙醇洗沉淀,真空干燥,复溶于dd水或TE中。