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酸性磷酸酶的显示方法

2019.4.18
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184****5725

致力于为分析测试行业奉献终身

实验概要

酸性磷酸酶能分解磷酸脂而释放出磷酸基。在pH5.0的环境中,磷酸基能与铅盐反应形成磷酸铅。但因其是无色的,所以再经过与硫化铵作用,形成棕黑色的硫化铅沉淀,由此就能显示酸性磷酸酶在细胞内的存在与分布。

主要试剂

10%中性福尔马林(pH6.8~7.1)

酸性磷酸酶作用液

2%β—甘油磷酸钠 4ml

1%硫化胺溶液

姬姆萨染液(1:30)

6%淀粉肉汤

实验材料

小鼠腹腔液涂片

实验步骤

1. 取小白鼠一只,每日腹腔注射6%淀粉肉汤1ml,连续注射三天。

2. 在第三天注射后3~4h,再向腹腔注射生理盐水1ml,过3min后在原注射部位抽取腹腔液0.1~0.2ml。请注意!注射和抽液的进针部位和深度要保持一致。否则可能抽不出腹腔液。

3. 将腹腔液滴在预冷的载玻片上,每片1~2滴,涂片,将玻片垂直插入玻片架,迅速放到冰箱内(4℃),让细胞自行铺展。

4. 30min后,将玻片转入10%中性福尔马林,冰箱内4℃固定30min。

5. 自来水漂洗5min,把水甩干。

6. 转入酸性磷酸酶作用液中,37℃处理30min。

7. 自来水漂洗片刻。

8. 1%硫化胺处理3~5min。

9. 自来水冲洗,甩干。

10. 用1∶30的姬姆萨染液染色15min。

11. 自来水冲去染液,用磷酸盐缓冲液临时封片,镜检。

12. 对照实验:
将第3步的腹腔液涂片置50℃温箱中处理30min,使酶失活,再进行6~11步的同样实验。


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