实验概要
酸性磷酸酶能分解磷酸脂而释放出磷酸基。在pH5.0的环境中,磷酸基能与铅盐反应形成磷酸铅。但因其是无色的,所以再经过与硫化铵作用,形成棕黑色的硫化铅沉淀,由此就能显示酸性磷酸酶在细胞内的存在与分布。
主要试剂
10%中性福尔马林(pH6.8~7.1)
酸性磷酸酶作用液
2%β—甘油磷酸钠 4ml
1%硫化胺溶液
姬姆萨染液(1:30)
6%淀粉肉汤
实验材料
小鼠腹腔液涂片
实验步骤
1. 取小白鼠一只,每日腹腔注射6%淀粉肉汤1ml,连续注射三天。
2. 在第三天注射后3~4h,再向腹腔注射生理盐水1ml,过3min后在原注射部位抽取腹腔液0.1~0.2ml。请注意!注射和抽液的进针部位和深度要保持一致。否则可能抽不出腹腔液。
3. 将腹腔液滴在预冷的载玻片上,每片1~2滴,涂片,将玻片垂直插入玻片架,迅速放到冰箱内(4℃),让细胞自行铺展。
4. 30min后,将玻片转入10%中性福尔马林,冰箱内4℃固定30min。
5. 自来水漂洗5min,把水甩干。
6. 转入酸性磷酸酶作用液中,37℃处理30min。
7. 自来水漂洗片刻。
8. 1%硫化胺处理3~5min。
9. 自来水冲洗,甩干。
10. 用1∶30的姬姆萨染液染色15min。
11. 自来水冲去染液,用磷酸盐缓冲液临时封片,镜检。
12. 对照实验:
将第3步的腹腔液涂片置50℃温箱中处理30min,使酶失活,再进行6~11步的同样实验。