实验概要
大量的方法已经被设计用于筛选大规模的噬菌体肽库。其中最简单的形式就是使用直接吸附的方式将靶分子固定于一个固体支持物上，然后使其接触到噬菌体库。那些不能与之结合的噬菌体在一系列洗涤的过程中将会被除去，而可以结合的噬菌体克隆将在酸性洗脱后被重新获得。
主要试剂
1. 磷酸盐缓冲液
2. PBS/0.1％和1％BSA
3. 抗体封闭肽
4. 酸性洗脱液(0.1mol/L HCl，甘氨酸调节pH为2.2，0.1％BSA)
5. E.coli ARl 292从K91菌株衍生：HfrCavallithirecA：cat(Affymax Inc.)
6. LB培养基(1％蛋白胨，0.5％酵母提取物，0.5％NaCl)
主要设备
ELISA酶标板(Dynatech lmmulon-4)
实验步骤
1. 亲和筛选
1) 使用PBS稀释捕捉抗体至浓度为100ug/ml，并将96孔酶标板其中12个孔中每孔各加入50ul上述溶液，于37℃孵育1小时。
2) 使用PBS洗板3次。用PBS/l％BSA注满板孔，于37℃孵育1小时，以封闭板孔。
3) 用PBS洗板，并加入100ul可溶性受体，于室温下孵育l小时或于4℃放置24小时。
4) 使用PBS洗板3次。于每孔中加入50ul 100umol/L抗体封闭肽溶液，于4℃孵育30分钟。
5) 稀释一份噬菌粒库至PBS/1％BSA中，至终体积为1。2ml，并各加入100ul到经受体包被的孔中。于4℃振摇孵育2小时。
6) 用冷PBS洗板5次，后用PBS/1％BSA注满板孔，于4℃孵育30分钟。
7) 用冷PBS洗板5次，于每孔中加入酸性洗脱液100ul，于室温下孵育10分钟。转移洗脱液到一个离心管中，用70ul 2mol/LTris碱液中和(pH未调节)。
2. 所筛选噬菌体的扩增
1) 挑取单克隆ARl 292菌株到5m1LB培养基中，37℃振摇培养过夜。
2) 加lml上述过夜培养物至20mlLB培养基中，振摇培养直至OD600值达到0.4。培养物于4℃6000r/min转速(JA.20转子)离心10分钟，沉淀用2mlLB培养基重悬。
3) 加入lml噬菌体洗出液到lmlARl 292细胞中，于37℃静置20分钟。将噬菌体感染后的细胞加入到20mlSOPamp/glu培养基中，37℃振摇培养直至OD600值达到0.4。
4) 加入VCS-M13辅助噬菌体(约l0l0单位)到上述培养物中，于37℃静置孵育20分钟。再加入220ul 20％的阿拉伯糖溶液以及22ul 20mg/ml的卡那霉素溶液，于37℃振摇培养过夜。
5) 培养物于10000r/min离心15分钟。转移上清到一个新的离心管中，然后加入0.2倍体积的PEG/NaCl，充分混合后置于冰上1小时。
6) 于10000r/min离心15分钟以沉淀噬菌体。除去上清后，噬菌体沉淀用lmlPBS/0.1％BSA重悬。
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