实验概要
本实验介绍了藻酸盐包裹小鼠肿瘤细胞实验操作流程。
主要试剂
藻酸钠,CaCl2,FITC标记的葡聚糖(FITC-Dextran)
主要设备
移液器,磁力搅拌器,超净台,解剖台,注射器,荧光酶标仪,离心机
实验材料
小鼠肿瘤细胞,免疫小鼠
实验步骤
1. 将藻酸钠溶于无菌生理盐水,终浓度为 1.5%;
2. 收集培养的肿瘤细胞,用无血清的培养基洗涤1 次,将细胞沉淀重悬于1.5%藻酸钠溶液中;
3. 将上述肿瘤细胞悬浮液用 1 ml 加样枪缓慢滴入磁力搅拌的 250 mMCaCl2溶液中,形成乳白色的藻酸盐小珠。继续静置于 250 mMCaCl2 中 30 min 即可使用。以上操作步骤均在无菌条件下进行;
4. 将第 4 次免疫后 7 天的小鼠用苯巴比妥钠 0.1ml( 按 100 mg/kg 计) 腹腔注射麻醉,小鼠麻醉后置于解剖台上,切开背部皮肤,皮下植入 4 粒藻酸盐包裹颗粒,缝合皮肤,外敷手术胶膜;5天以后,小鼠经尾静脉注入100 μl (按 100 mg/kg计) FITC标记的葡聚糖(FITC-Dextran);
5. 20 min 后处死动物,取出藻酸盐颗粒,常温下加入1 ml 的生理盐水,剪碎研磨颗粒,再加入1ml的生理盐水,混匀标本,放置1 小时, 1500 rpm离心 5 min。取上清液用荧光酶标仪测定;
6. 用不同浓度的 FITC-Dextran 制备标准曲线。