抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)活性的测定

实验概要

测定植物中抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)的活性。

实验原理

    AsA-POD催化AsA与H2O2反应，使AsA氧化成单脱氢抗坏血酸（MDAsA）。随着AsA被氧化，溶液中290nm波长下的消光度值（A290）下降，根据单位时间内A290减少值，计算AsA-POD活性。AsA氧化量按消光系数2.8(mmol/L)/cm计算，酶活性可用μmolAsA/(g FW•h)表示。

主要试剂

50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH7.0，内含0.1mmol/L EDTA-Na2）；

0.3mmol/L AsA；

20μmol/L AsA；

0.06mmol/L H2O2。

主要设备

离心机；紫外分光光度计；研钵；试管。

实验材料

受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官。

实验步骤

1. 酶液制备  取1.0g植物叶片剪碎，按1∶3（W/V）加入预冷的50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用2层纱布过滤，滤液离心（4000×g）10min，上清液作酶粗提液供测定。
 

2. 酶活性测定  3ml反应混合液中含50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH7.0），0.1mmol/L EDTA-Na2，0.3mmol/L AsA，0.06mmol/L H2O2和0.1ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10～30秒内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性。