流式细胞仪PI染色死细胞方法

PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。

Ⅰ、材料

1、       PI（e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA）

2、       缓冲体系：1×PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scientific,Santa Ana,CA)+2%新鲜小牛血清＋0.1%叠氮钠

A、  PI缓冲液

用缓冲液将PI溶解至终浓度为1mg/ml中，于4℃下密封避光保存1个月。

B、  PI浓缩液

用缓冲液将PI溶解至终浓度为500mg/ml，于4℃下密封避光保存。我们已经检测过将PI浓缩液放置数月后，并无观察到染色活性的丢失。

Ⅱ、方法：

将样品细胞按程序描述的方法用FITC标记的单克隆抗体进行单色染色。

A、  在最后的洗涤步骤后，将样品细胞悬浮于PI缓冲液中，于4℃下密封避光保存以备通过流式细胞仪分析；

B、  在最后的洗涤步骤后，如前述将样品细胞悬浮后备用。如果您想检测样品细胞活力，在每一管中加入2μl的PI浓缩液，混匀。将样品置于4℃下密封避光保存以备流式细胞仪分析。

注意：此法并不适用于甲醛固定的样品。在根据Sasaki等人的方法（Cytometry 8:413,1987）用PE标记的抗体对样品进行染色时可以适用此方法。然而，由于PI和PE的发射光谱的广泛交迭，因此本方法适于用7-氨基-放线菌素D将死细胞加以区分。