一、方法概述
本方法依据HJ 636—2012。在 120～124℃下，碱性过硫酸钾溶液使样品中含氮化合物的氮转化为硝酸盐，采用紫外分光光度法于波长 220nm 和 275nm 处，分别测定吸光度 A220 和 A275，按公式
A＝A220－2A275计算校正吸光度 A，总氮（以 N 计）含量与校正吸光度 A 成正比。
本方法适用于地表水、地下水、工业废水和生活污水中总氮的测定。
二、仪器和试剂
1. 仪器及设备
1.1紫外分光光度计DR5000、10mm石英比色皿。
1.2高压蒸汽灭菌器：最高工作压力不低于 1.1～1.4kg/cm2；最高工作温度不低于 120～124℃。
1.3具塞磨口玻璃比色管：25ml；量筒、滴管、烧杯等
1.4中速定性滤纸
2. 干扰和消除
2.1当碘离子含量相对于总氮含量的 2.2 倍以上，溴离子含量相对于总氮含量的 3.4 倍以上时，对测定产生干扰。
2.2水样中的六价铬离子和三价铁离子对测定产生干扰，可加入 5%盐酸羟胺溶液 1～2ml消除。
3.试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为无氨水（3.1）
3.1无氨水：每升水中加入 0.10ml 浓硫酸蒸馏，收集馏出液于具塞玻璃容器中。也可使用新制备的去离子水。
3.2氢氧化钠（NaOH）：含氮量应小于 0.0005%。
3.3过硫酸钾（K2S2O8）：含氮量应小于 0.0005%。
3.4硝酸钾（KNO3）：在 105～110℃下烘干 2h，在干燥器中冷却至室温（优级纯）。
3.5浓盐酸：ρ（HCl）=1.19g/ml（分析纯）。
3.6浓硫酸：ρ（H2SO4）=1.84g/ml（分析纯）。
3.7盐酸溶液：1+9。
3.8硫酸溶液：1+35。
3.9氢氧化钠溶液：ρ（NaOH）=200g/L。
称取 20.0g 氢氧化钠（3.2）溶于少量水中，稀释至 100ml。
3.10氢氧化钠溶液：ρ（NaOH）=20g/L。
量取氢氧化钠溶液（3.9）10.0ml，用水稀释至 100ml。
3.11碱性过硫酸钾溶液：称取 40.0g 过硫酸钾（3.2）溶于 600ml 水中（可置于 50℃水浴中加热至全部溶解）；另称取 15.0g 氢氧化钠（3.1）溶于 300ml 水中。待氢氧化钠溶液温度冷却至室温后，混合两种溶液定容至 1000ml，存放于聚乙烯瓶中，可保存一周。
3.12硝酸钾标准贮备液：ρ（N）＝100mg/L
称取 0.7218g 硝酸钾（3.3）溶于适量水，移至 1000ml 容量瓶中，用水稀释至标线，混匀。加入 1～2ml 三氯甲烷作为保护剂，在 0～10℃暗处保存，可稳定 6 个月。
3.13硝酸钾标准使用液：ρ（N）＝10.0mg/L
量取 10.00ml 硝酸钾标准贮备液（3.11）至 100ml 容量瓶中，用水稀释至标线，混匀，临用现配。
4．样的制备
取适量样品用氢氧化钠溶液（3.10）或硫酸溶液（3.8）调节 pH 值至 5～9，待测。
三、分析步骤
分别量取 0.00、0.20、0.50、1.00、3.00 和 7.00ml 硝酸钾标准使用液（6.13）于 25ml具塞磨口玻璃比色管中，其对应的总氮（以 N 计）含量分别为 0.00、2.00、5.00、10.0、30.0和 70.0μg。加水稀释至 10.00ml，再加入 5.00ml 碱性过硫酸钾溶液，塞紧管塞，用纱布和线绳扎紧管塞，以防弹出。将比色管置于高压蒸汽灭菌器中，加热至顶压阀吹气，关阀，继续加热至 120℃开始计时，保持温度在 120～124℃之间 30min。自然冷却、开阀放气，移去外盖，取出比色管冷却至室温，按住管塞将比色管中的液体颠倒混匀 2～3 次。
注 1：若比色管在消解过程中出现管口或管塞破裂，应重新取样分析。
每个比色管分别加入 1.0ml 盐酸溶液，用水稀释至 25ml 标线，盖塞混匀。使用10mm 石英比色皿，在紫外分光光度计上，以水作参比，分别于波长 220nm 和 275nm 处测定吸光度。零浓度的校正吸光度 Ab、其他标准系列的校正吸光度 As 及其差值 Ar 按公式（2）、（3）和（4）进行计算。以总氮（以 N 计）含量（μg）为横坐标，对应的 Ar 值为纵坐标，绘制校准曲线。
Ab＝Ab220－2Ab275（2）
As＝As220－2As275 （3）
Ar＝As－Ab（4）
式中：
Ab ——零浓度（空白）溶液的校正吸光度；
Ab220 ——零浓度（空白）溶液于波长 220nm 处的吸光度；
Ab275 ——零浓度（空白）溶液于波长 275nm 处的吸光度；
As ——标准溶液的校正吸光度；
As220 ——标准溶液于波长 220nm 处的吸光度；
As275 ——标准溶液于波长 275nm 处的吸光度；
Ar ——标准溶液校正吸光度与零浓度（空白）溶液校正吸光度的差。
四、数据处理及计算
4.1参照公式（2）～（4）计算试样校正吸光度和空白试验校正吸光度差值 Ar，样品中总的质量浓度 ρ（mg/L）按公式（5）进行计算。
ρ=
式中：
ρ ——样品中总氮（以 N 计）的质量浓度，mg/L；
Ar ——试样的校正吸光度与空白试验校正吸光度的差值；
a ——校准曲线的截距；
b ——校准曲线的斜率；
V ——试样体积，ml；
f ——稀释倍数。
4.2结果表示
当测定结果小于 1.00mg/L 时，保留到小数点后两位；大于等于 1.00mg/L 时，保留三位有效数字。
五、方法检出限和测定下限
按照标准中空白试验的方法“以 10 ml 实验用水代替试料，采用与测定完全相同的试剂、用量和分析步骤进行平行操作”，利用高 压蒸汽灭菌器重复消解 7 次空白，将各测定结果换算为总氮的浓度，
分别计算 7 次平行测定的标准偏差，按公式（1）计算方法检出限，
MDL = t ( n −1,0.99) × S （1）
式中： MDL ——方法检出限；
n ——样品的平行测定次数；
t ——自由度为 n -1，置信度为 99%时的 t 分布（单侧）；
S —— n 次平行测定的标准偏差。
其中，当自由度为 n -1，置信度为 99%时的 t 值为 3.143。
由表 1 可以看出，采用高压蒸汽灭菌器消解的检出限为 0.043 mg/L，故本标准规定检出限为 0.05 mg/L；以 4 倍检出限作为方法测定下限，因此规定本方法测定下限为 0.20 mg/L。因此本方法的检出限完全能够满足评价标准的要求。
六、方法精密度
七、方法准确度
八、质量保证和质量控制
1、校准曲线的相关系数 r 应大于等于 0.999。
2、每批样品应至少做一个空白试验，空白试验的校正吸光度 Ab 应小于 0.030。超过该值时应检查实验用水、试剂（主要是氢氧化钠和过硫酸钾）纯度、器皿和高压蒸汽灭菌器的污染状况。
3、每批样品应至少测定 10%的平行双样，样品数量少于 10 时，应至少测定一个平行双样。当样品总氮含量≤1.00mg/L 时，测定结果相对偏差应≤10%；当样品总氮含量＞1.00mg/L时，测定结果相对偏差应≤5%。测定结果以平行双样的平均值报出。
4、每批样品应测定一个校准曲线中间点浓度的标准溶液，其测定结果与校准曲线该点浓度的相对误差应≤10%。否则，需重新绘制校准曲线。
5、每批样品应至少测定 10%的加标样品，样品数量少于 10 时，应至少测定一个加标样品，加标回收率应在 90%～110%之间。
九、结论
采用本方法测定总氮的方法检出限为0.05 mg/L；方法精密度为6.0%；平均加标回收率98.4%。但在操作过程中应注意：①某些含氮有机物在本标准规定的测定条件下不能完全转化为硝酸盐。②测定应在无氨的实验室环境中进行，避免环境交叉污染对测定结果产生影响。③实验所用的器皿和高压蒸汽灭菌器等均应无氮污染。实验中所用的玻璃器皿应用盐酸溶液（3.7）或硫酸溶液（3.8）浸泡，用自来水冲洗后再用无氨水冲洗数次，洗净后立即使用。高压蒸汽灭菌器应每周清洗。④在碱性过硫酸钾溶液配制过程中，温度过高会导致过硫酸钾分解失效，因此要控制水浴温度在 60℃以下，而且应待氢氧化钠溶液温度冷却至室温后，再将其与过硫酸钾溶液混合、定容。⑤使用高压蒸汽灭菌器时，应定期检定压力表，并检查橡胶密封圈密封情况，避免因漏气而减压。
首页
