三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造 纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与 乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测 液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、 重现性以及回收率均符合国家标准。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
高效液相色谱仪（含UV1620紫外-可见检测器1台，P1620高压恒流泵1台；AT-330色谱柱温箱；FA2004分析天平；TGL-16G-A离心机；三聚氰胺标准品>99%；辛烷磺酸钠(色谱纯)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯)、纯净水。
1.2 标准品溶液配制
精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。
1.3 样品前处理
称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。取提取液250ul，加 入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC测定溶液。
1.4 色谱条件：
色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)
流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）
流速：1.0ml/min
波长：240nm
温度：40℃
2 实验结果
2.1 精密度实验
取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。
表1 精密度实验
NO. | Retention time（min） | Peak High | Peak Area |
1 | 11.933 | 289 | 4216.8 |
2 | 11.990 | 290 | 4264.2 |
3 | 11.928 | 287 | 4246.0 |
4 | 11.927 | 287 | 4242.8 |
5 | 11.923 | 284 | 4218.6 |
RSD(%) | 0.23 | 0.82 | 0.57 |
图1 三聚氰胺标准品
2.2 标准曲线
配置浓度分别为0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺标准工作液。将以上6种标准工 作液在上述色谱条件下按浓度由低至高进样。用最小二乘法以对照品浓度(横坐标X轴，µg/ ml)对峰面积(纵坐标Y轴)进行线性回归，求算标准曲线。
2.3 加样回收率和重现性实验
取已知三聚氰胺含量的酸奶样品，加入一定量的标准储备液，按“样品前处理” 操作，平行制备3份，得到样品溶液后按上述色谱条件进样分析，得到加样回收率及重现性结果，见表2。
表2 加样回收率和重现性（n=3）
Spiked(mg/kg) | Recovery(%) | RSD(%) |
35.0 | 87.2 | 1.37 |
图2 空白酸奶样品
图3 加标酸奶样品
2.4 检测限及定量限
依据噪声值，按3倍信噪比，计算其理论检出限，为0.221 mg/kg；按10倍信噪比，计算其定量限，为0.738 mg/kg。
3 结论
本方法优化了高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺测定方法，该方法简化了前处理步骤，易于操作，线性关系良好，有较好的精密度和重现性，回收率满足国家标准的要求，检出限和定量限也符合目前三聚氰胺的检测要求。
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