ELISA法具有灵敏高、特异性强、重复性好的特点。被广泛用于临床上多种疾病的检查、诊断，但在标本的采集、试剂的质量、操作的程序、结果的判断等方面受人为的因素影响较多，而临床对血液检测的准确度和精确度要求较高，不允许有误差，否则将导致极其严重的后果。为了确保安全用血，笔者就实际工作中常见的影响因素进行小结。
1 标本的采集
1.1 防止污染 血液标本的采集做到一人一针一管，吸样时，必需使用一次性移液嘴。以HBsAg为例，若有1/万浓度阳性血清的污染则能引起被污染的标本测定结果为阳性。
1.2 及时测定 血样采集后应及时检测，久置后细胞代谢，细菌繁殖，增加了许多异性物质，易产生溶血。如不能及时测定，应将标本血清分离后放置在4℃冰箱中保存，但不超过3天。
1.3 避免稀释 血液的检测包括初检和复检，复检的标本来源于连接采血袋的皮管中的全血，在留取时，不能采用被保养液（抗凝剂）稀释后的抗凝血进行测定，否则被检测物的浓度降低，结果出现假阴性。
2 试剂的影响
2.1 目前卫生部国家药品生物制品研究所对国内应用甚广的数种ELISA试剂，按照国家标准实行“批批检”，凡合格者，贴上国家防伪标签才能在市场上推销使用。如HBsAg、抗-HCV、抗-HIV抗体等。
2.2 不同批号、不同厂家的试剂，由于酶标记物中酶的浓度不尽相同，与固相载体上的相应抗原或抗体发生特异性反应的程度不同，故不能混合使用。对于超过有效期的试剂则严禁使用。
2.3 试剂的运输、贮存要在低温（2～8℃）条件下进行。因酶类物质是一种特殊的蛋白质，久置、反复冻融或受热后，酶易失去活性，试剂条如果一次用不完时，应进行密封保存防止受潮。
3操作的要求
3.1 不同厂家生产的试剂其样品加入量、水浴时间、阴阳对照等各不相同，应严格按照说明书中要求进行，吸样要准确，试剂加入的顺序不能颠倒，每一步加样后均需在振荡器上混匀充分。
3.2 洗涤的效果直接影响实验结果的准确性。每次洗板之前要配制新鲜的洗涤液，室温较低时，洗涤液要在水浴箱中先预温30min。用洗板机进行洗板时，每次都要吸净孔内洗液且不能留有气泡，倾去洗液时，必需用吸水纸吸尽洗液。
3.3 阴、阳性对照对测定结果的准确性至关重要，每次试验都要做3份以上阴性对照和2份以上阳性对照，要严格注意试剂盒说明书中规定的阴、阳性对照A值的界限。
4 结果判断
4.1 认真做好室内和室间质控。根据阳性对照计算值和阴性对照计算值来判断测试结果是否有效，每次测试结果必需在酶标仪上打印出来且记录完整，便于前后对照和查找。
4.2 临界值结果OD值上、下10%～15%的区域为灰区，报告时要甚重，因为ELISA法的影响因素较多，±15%内的差异视为正常。遇此情况，可重复测试或进一步做确证试验，以确保结果正确，减少临床用血中的纠纷。
4.3 结果表示方法
4.3.1 阳性判定值法（Cut-Value） 如某试剂盒的阳性判定值=NCx+0.05其中NCx为阴性对照的平均A值，0.05为常数。标本A值≥阳性判定值其结果为阳性。
4.3.2 S/N值 待测标本A值/阴性对照A值≥2.1倍为阳性，当试剂盒阴性对照物用某些代用品时，其阴性对照A值<0.05时，按0.05计算，以防假阳性出现。
4.3.3 S/CO值S/CO值≥1为阳性 S为标本A值，CO即Cut-off值，为便于统一计算和比较，S/CO值的判断将成为国内外统一判断结果的趋势。例如:某标本检测HBsAg其A值为0.2，N值为0.06，其CO值0.06×2.1=0.126，因S=0.2则S/CO=0.2/0.126=1.6>1故该标本应判为阳性。
5 小结
血液检测质量是临床用血安全的保证，当病人急需要救助时，输入健康的血液可以救人一命，如果输入不健康或“亚健康”的血液，就将后患无穷。血液检测指标中有三项是ELISA法，可见酶联免疫吸附试验的影响因素在输血检测中是何等重要。
作者单位:224700江苏省建湖县人民医院
中华现代中西医杂志 2004年9月第2卷第9期
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