2.2.3 放射免疫沉淀试验(RIPA) 本法是将病毒的蛋白与待测血清混合,如有HIV抗体，则同位素标记的HIV蛋白与之结合产生沉淀，沉淀物用配套的缓冲液和十二烷基硫酸(SDS)洗脱,即可将病毒抗原分离，最后病毒蛋白用放射自显影鉴定,同时用已知的分子标记物比较。此方法敏感性和特异性比WB实验方法高,但费时且技术难度大，目前难以普及推广。
3 CD4+和CD8+Ｔ淋巴细胞计数
计数CD4+和CD8+T淋巴细胞的数量，是以细胞内P24抗原作为标志，运用流式细胞仪对P24抗原阳性细胞进行计数。人体感染了HIV后，其主要病理过程是免疫系统的损害，主要表现为CD4+T细胞的丢失，绝对数量的减少,同时CD8+细胞数量增加，使CD4+和CD8+的比例失调。随着CD4+数量的减少，患者逐渐产生各种症状,机会性感染和肿瘤的发病率也大为增加。CD4+的数量变化与AIDS患者的死亡率密切相关，CD4+数量越低,患者存活的时间越短。CD4+也是药物及各种疗法的有效考核指标，任何药物或疗法只要在治疗8周后使患者的CD4+数量每微升外周血增加50个以上判为有效,否则判为无效。但由于CD4+和CD8+不是特异性的，如肿瘤患者、先天性免疫缺陷等均可造成CD4+数量降低和CD4+/CD8+比例失调。另一方面由于人体免疫功能受多种因素影响,健康人CD4+和CD8+的数量范围较宽，以及CD4+、CD8+本身检测结果有一定误差，使结果判断的准确性受到一定限制。
4 核酸检测
4.1 原位杂交 本法是应用特定的标记探针以分子杂交法直接检测标本中的HIV病毒靶核酸，标记探针有放射性标记、酶标记、化学发光标记等。这些方法阳性率比聚合酶链反应(PCR)稍低，随着核酸扩增技术的出现，原位杂交探针技术也失去了其应用价值。
4.2 聚合酶链反应技术 目前有两种方法用于HIV感染的检查：(1)PCR DNA用于扩增前病毒DNA以诊断HIV的感染；(2)PCR RNA用逆转录PCR(RT PCR)法可检出血浆中HIV基因组的存在。
4.3 定量PCR检测病毒载量 目前常用的HIV RNA定量测定(病毒载量测定)方法有逆转录PCR试验(RT PCR)、核酸序列扩增试验(NASBA)、分枝DNA杂交试验(bDNA)。HIV RNA PCR定量检测，敏感性为95%～98%，假阳性率为2%～9%，特异性取决于病毒载量，在急性HIV感染时敏感性为100%，特异性为97%，当在病毒载量大于105拷贝/毫升时特异性为100%。核酸检测技术主要用于被高度怀疑有原发感染，且经抗体检测之后抗体检测阴性或不确定时；有高危行为史或暴露史，特别是伴有相应的临床表现时，用核酸检测进行辅助诊断。早期诊断主要用于个体检测、血液筛查、性病门诊患者筛查、HIV阳性产妇的婴儿诊断。
4.4 实时荧光定量PCR技术(FQ PCR) 本实验是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。国外使用基于荧光实时PCR技术的核酸检测系统(NAT)，同时检测乙型肝炎与丙型肝炎病毒和HIV-1核酸，对于血清学检查阴性的献血员进行筛查，以弥补窗口期造成的漏检。
5 基因芯片技术
HIV病毒的基因芯片将PCR技术与核酸分子杂交完美结合，通过对HIV基因组分析，将该病毒的高度保守序列作为鉴定指标，可以直接对病毒病原体进行检测，极大地提高了诊断的准确性。目前应用DNA芯片技术在艾滋病患者出现抗体反应前检测HIV，对艾滋病的早期诊断有十分重要的意义。基因芯片的发展包括以下几个方面应用：(1)单链DNA片段芯片的应用。(2)单核苷酸多态性芯片的应用。(3)比较基因组杂交的应用。(4)基因表达谱检测应用。(5)疾病诊断基因芯片应用。
综上所述，第4代ELISA试剂的研制成功,在缩短“窗口期”，提高检测敏感性方面有良好的应用前景。核酸技术的应用和CD4+T淋巴细胞的检测用于AIDS患者的疗效观察是标准指标。生物芯片技术作为PCR技术后的下一次革命性技术突破，将会给HIV检测带来一个新的发展方向。
参 考 文 献
[1]M ylonakis E, palionM, Lally M, et al. Laboratory testing for infection with the human immunodeficiency virus: established and novel approaches[J]. Am J Med, 2000, 109 (7): 568-576.
[2]Weber B, Berger A, Rabenau H, et al. Evaluation of a new combined antigen and antibody human immunodeficiency virus screening assay, VID-AS HIV DUO Ultra [J]. J Clin Microbiol, 2002, 40(4): 1420-1426.
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