小量制备
氯化铯法
实验方法原理 | 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。 |
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实验材料 | 细菌 |
试剂、试剂盒 | TE 氯化铯 溴化乙锭 NaCl 乙醇 CTAB |
仪器、耗材 | 离心机 摇床 |
实验步骤 |
1. 培养5 ml 的细菌培养物至饱和状态,取1.5 ml 的培养物离心2 min。
4. 加入100 ul 5 mol/l NaCl充分混匀,再加入80 ul CTAB/NaCl溶液,混匀,于65℃温育10 min。
5. 加入等体积的氯仿/异戊醇,混匀,离心4~5 min将上清液转人一个新管中,如果难以移出上清,先用牙签除去界面物质。
6. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇,混匀,离心5 min,将上清液转入一只新管中。
7. 加入0.6体积异丙醇,轻轻混合直到DNA沉淀下来,用一个封口的巴斯德管将沉淀转移至1 ml 的70%乙醇中洗涤。
8. 离心5 min,弃上清,用冻干机稍加干燥,重溶于的下100 ul TE缓冲液,每次酶切反应用10~15 μl。
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