实验方法原理 | 本方案是 Kupiec 等所述方法(1987) 的改良版本,包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织,用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物(染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂,能分离蛋白质-DNA 复合物并使蛋白变性和释放,但他并不明显影响蛋白酶 K 的活性。用本程序制备的基因组 DNA 很大 7200 kb,适于用高包装容量载体构建文库及通过脉冲凝胶电泳分析大片段 DNA。本方法有两个缺点:比其他方法需要更多的时间;所制备 DNA 的最终浓度颇低(约 10 μg/ml )。从 1X108 培养的非整倍体哺乳类细胞(如 HeLa 细胞)中大约可制备 1 mg 高分子质量 DNA。 |
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实验材料 | λ 噬菌体的线性单体和多联体 哺乳类细胞 新鲜组织 血样 |
试剂、试剂盒 | 透析缓冲液 甲酰胺变性缓冲液 TE |
仪器、耗材 | 脉冲电场凝胶或 0.6% 琼脂糖凝胶 带有不锈钢杯的搅拌器 火棉胶袋 尖头去除的黄色尖头 透析管夹 玻璃棒 水浴或孵箱 |
实验步骤 |
一、材料 展开 |