多次分离
单次分离
实验方法原理 | |
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实验材料 | 多肽:ACTH 4-10 |
试剂、试剂盒 | 血管紧缩素I和血管紧缩素II 0.05 mmol/L 和 0.25 mmol/L 磷酸钠缓冲液(pH 2.30 存储于 4℃) 0.1 mol/L 氢氧化钠 |
仪器、耗材 | 75 μm 内径的融合硅毛细管柱 CE 仪器 锥形微量瓶 |
实验步骤 |
1. 低压下(0.5 lb/in2)用以下溶液冲洗预处理毛细管: 10 倍柱体积的 0.1 mol/L NaOH 10 倍柱体积的水 4 倍柱体积的 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30。 柱存储于 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30。 2. 将各 0.2 mg 的 ACTH4-10、血管紧缩素 I 和血管紧缩素 II 溶于 1 ml 0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30(终浓度 = 0.6 mg 多肽/ml)制备多肽混合物。冻存 100 μl 每管混合物于 -20℃。 3. 在 0.5 lb/in2,10 s 内用低压注射上样 10~20 nl 多肽混合物。 4. 使用以下条件分离多肽混合物: 电解质:0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30 探测波长:200 nm 温度:25℃ 电压:25 kV 分部大小:每收集管 3 min 5. 用一系列的含 10 μl 0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30 的微量锥形瓶替换标准的出口池(正极)。收集 3 min 的组分于每一个瓶子以利于了解分离的长度。 6. 重复注射和分离(步骤 3~5)4 次,合并来自相应的组分号码的内容物。 7. 用以前阐述的分析分离法监视多肽内容的组分(见解析多肽分离实验)。
展开 |
注意事项 | |
其他 |
多次收集方法要有效,多肽的洗脱时间必须具有重复性。以下的方法使用P/ACE5000毛细管电泳仪器进行多肽混合物的分离。 |