基本方案
实验方法原理 |
L-苹果酸:NAD 氧化还原酶,MDH。 L-苹果酸 + NAD+⇌ 草酰乙酸 + NADH + H+ 实验首选逆反应。 |
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实验材料 | MDH 稀释溶液 |
试剂、试剂盒 | 磷酸钾 NADH 草酰乙酸 |
仪器、耗材 | 分光光度计 |
实验步骤 |
实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98 ml 实验混合物 0.02 ml MDH 稀释溶液 25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
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注意事项 | |
其他 |
试剂 0.1 mol/l 磷酸钾,pH 7.5 0.01 mol/l NADH(71 mg 溶于 10 ml H2O) 0.1 mol/l 草酰乙酸(Mr=132.1,132 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/l 磷酸钾,pH 7.5 中) MDH 原料溶液(例如 10 mg/ml,用 0.1 mol/l 磷酸钾 pH7.5 稀释至 1 IU/ml)
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