急性中毒物质的快速筛选和检测（三）

　　APHO-E-01-2005鼠药(毒鼠强、氟乙酰胺、敌鼠等)中毒残留物的快速筛选检测　　　　

在我国，每年食物中毒事件中，鼠药中毒占有相当大的比例。杀鼠药对人、畜皆具有不同程度的毒性，误食或人为投毒食用后，严重者有致命的后果。目前常用的杀鼠药有敌鼠、安妥和磷化锌。“毒鼠强”和“氟乙酰胺”虽然早已被国家所禁令使用，而近年来鼠药中毒事件仍以“毒鼠强”、“氟乙酰胺”和“敌鼠”为主。几种鼠药的化学性质与定性方法如下。　　　　

        1.化学性质：

　　1.1毒鼠强：毒鼠强又名没鼠命，三步倒，四二四等。轻质粉末。熔点250～254℃。在水中溶解度约0.25mg/ml，在丙酮、乙酸乙酯、苯中的溶解度大于水，溶于二甲亚砜。可经消化道及呼吸道吸收。不易经完整的皮肤吸收。哺乳动物口服最低致死剂量为0.10mg/kg。口服6～12 mg即为人的致死量，剂量大时，3分钟即可致死。

　　1.2氟乙酰胺：氟乙酰胺又称敌蚜胺、1080，也称“一扫光”，对人畜具有剧毒性，且可造成人畜二次中毒。氟乙酰胺在干燥条件下比较稳定，易溶于水，在中性和酸性水溶液中可水解成氟乙酸，在碱性水溶液中可水解成氟乙酸钠释放出氨。

　　1.3敌鼠钠盐：敌鼠的化学名为2-二苯基乙酰基-1，3-茚二酮。一种抗凝血的高效杀鼠剂，可使内脏出血不止而死亡。市售的是1%敌鼠粉剂和1%敌鼠钠盐。对人畜有剧毒。钠盐口服0.06～0.25克可引起中毒，0.5～2.5克可致死。

　　1.4安妥：安妥的化学名称为甲萘硫脲。对人的致死量为4～6克。纯品为无色结晶，工业品为灰紫色粉末，不溶于水，稍溶于硝酸，可溶于碱液及有机溶剂，易溶于丙酮。

　　1.5磷化锌：磷化锌也是一种常用的杀鼠药。它是深灰色或近似黑色、有闪光的重质粉末，易溶于酸并产生无色具有蒜臭的剧毒磷化氢气体。误食后在胃酸作用下，放出磷化氢，腐蚀刺激消化道，吸收入血后，能破坏机体代谢，并能作用于内分泌及神经系统，毒物经肝脏解毒，肾脏排泄，故可引起肝肾的损害。

　　2.检测用试剂

　　2.1毒鼠强定性试液包

　　2.2敌鼠钠盐定性试液包

　　2.3安妥定性试纸

　　2.4氟乙酰胺定性试液包

　　3毒鼠强、敌鼠钠盐、安妥测定前的样品处理

　　3.1无色液体(饮用水等)：样品不需处理，直接进入样品测定。

　　3.2液体样品(牛奶、豆浆等)：取1~3ml放入比色管中，加入5ml乙酸乙酯，上下振摇50次以上，静置后取上清液测定。

　　3.3固体(粮食、面粉、毒铒等)或半固体(呕吐物、胃内容物、剩余饭菜等)样品：取1~3克放入比色管中，加入5ml乙酸乙酯，充分振摇，静置后用滤纸过滤，取澄清液测定。　　 　　4毒鼠强测定：取样品处理后的上清液或滤液2ml以上于10ml比色管中，在85℃±5℃的水浴中加热挥干乙酸乙酯，放至室温后，向试管中加入2滴毒鼠强显色剂，加入5ml(约115滴)毒鼠强试液(强酸溶液，谨慎操作)，轻轻摇动后，将试管放回水浴中，加热3~5分钟取出，观察颜色变化。同时做空白和阳性对照试验。阳性反应为淡紫红到深紫红色。阴性为试剂本色。检出下限5μg。

　　4.1注意事项：①空白对照试验，是取与检样相同(不含毒鼠强)的物质与检样同时操作，以便于观察对比。对于呕吐物、胃内容物等样品，一定要加阳性对照试验。②有些样品的提取液带有较深的颜色，应加大提取液的用量，在提取液中加少量活性炭，或中性氧化铝，振摇脱色，过滤后滤液挥干测定。经过脱色的样品，毒鼠强会有一些损失，一般在30~40%。③本方法为快速筛选方法，工作中可根据实际情况加大样品和乙酸乙酯用量。提取后的乙酸乙酯应尽量少含水分(一是不易挥干，二是水分中可能会含有糖、纤维素等成分，干扰测定)，如果含的水分多，可加入无水硫酸钠进行脱水后过滤，并将乙酸乙酯挥干后测定。④本方法不适于血液和组织器官样品的测定。⑤醛类物质对测定有干扰。排除方法：液体样品加热煮沸2分钟，固体样品置90℃烘箱加热30分钟后再测定。⑥毒鼠强的检测目前无国家标准分析方法，对重要案件的处理要慎重，应采用气相或液相色谱做进一步对照确定。对于中毒案件，还可根据中毒者的中毒症状作参考。⑦毒鼠强显色剂有效期1年，阳性对照试验无反应时不可再用。

　　4.2毒鼠强定性试液的配制：如果有定制包装的毒鼠强定性试液包，可以直接使用。如果有毒鼠强显色剂，可按以下方法配制毒鼠强定性试液。

　　毒鼠强显色剂为茶色或棕色带有微红色的酸性液体，配置成定性液与毒鼠强反应后变成淡紫红到深紫红色。阴性为试剂本色

　　取200ml蒸馏水或纯净水于烧杯中，缓慢加入300ml优级纯硫酸，边加边搅拌，等溶液凉至室温后，用水补齐至500ml即为60%的硫酸，将毒鼠强显色剂(10ml/支)小心加入，混匀后即为毒鼠强定性液。每份样品使用5ml。显色剂与60%硫酸也可单独使用，即向样品中加入2~3滴显色剂，再加入5ml 60%的硫酸，具体使用方法详见毒鼠强快速定性试液包使用说明书。　　

　　5敌鼠钠盐测定：将试纸对折裁开，将处理后的样品溶液1滴于一片试纸上，(根据对样品的怀疑程度。可等溶液稍干后，追加样品溶液的滴数以提高方法的灵敏度)，待溶液稍干后，在滴加样品溶液处滴上1滴敌鼠显色剂，如果出现砖红色斑点为强阳性反应，如果出现红色环状为弱阳性反应。方法灵敏度：检出限量为5微克。　　

　　6安妥测定：将提取液1滴于安妥检测试纸片上，并喷上雾水或用水使纸片湿润，观察试纸颜色变化，呈现黄色，示有安妥存在(最低检出限为0.02mg/g，ml)。　　

　　7氟乙酰胺测定

　　方法一

　　7.1样品处理：无色液体可直接测定。有颜液体，可加少量活性炭或中性氧化铝振摇脱色，过滤后测定。固体样品研碎后取2～5克加3倍于样品重的蒸馏水或纯净水，半流体样品取2～5克加等量于样品重的蒸馏水或纯净水，振摇提取，过滤，将滤液煮沸浓缩至1ml左右测定。中毒残留物或胃内容物样品处理时，可适当加大取样量。

　　7.2样品测定：取待检液1ml左右于试管中，加氢氧化钠溶液10滴，加盐酸羟胺溶液5滴，置沸水中水浴5分钟(使其充分水解成氟乙酸钠释放出氨)。取出放冷，加盐酸溶液9～10滴(调pH值3～5)后，加三氯化铁溶液3～10滴(使其与氟乙酸反应)，阳性结果为粉红或紫红色，尤其在滴加后的液面上更为明显(检出限可达50μg/ml)。测定时做空白对照试验，阴性结果为浅黄或黄色，有些空白对照为黄棕色絮状沉淀，静置后上层液变成无色或仅呈浅黄色。

　　7.3注意事项：①加盐酸溶液9滴后要用pH试纸测试溶液pH值，若pH值太高(碱度过高)，加入三氯化铁溶液时可产生红棕色沉淀，影响结果判定，造成假阳性结果；若pH值太低(酸度过高)，加入三氯化铁溶液后氟乙酰胺显色不敏锐或不显色，易造成假阴性结果。pH值可用氢氧化钠溶液和盐酸溶液反向调整。②空白对照试验，是取与检样相同(不含氟乙酰胺)的物质与检样同时操作，以便于观察对比。对于呕吐物、胃内容物等样品，应加阳性对照试验。③本方法不适于血液和组织器官样品的测定。④氟乙酰胺的检测目前无国家标准分析方法，对重要案件的处理要慎重，应采用气相或液相色谱做进一步对照确定。对于中毒案件，还可根据中毒者的中毒症状作参考。⑤三氯化铁溶液放置时间长时会有少量沉淀产生，摇匀后使用。组合试剂的有效期为1年，阳性对照试验无反应时不可再用。

　　方法二

　　奈氏试剂法。本方法也是测定氟乙酰胺方法中较好的方法，但由于所用的奈氏试剂中需要碘化汞(毒品)，需当地公安部门批准才能在试剂商店购买，这里仅提供检验方法。

　　7.4奈氏试剂的配制：将10g碘化汞和7g碘化钾溶于10ml水中，另将24.4g氢氧化钾溶于内有70ml水的100ml容量瓶中，并冷却至室温。将上述碘化汞和碘化钾溶液慢慢注入容量瓶中，边加边摇动。加水至刻度，摇匀，放置2天后使用。试剂应保存在棕色玻璃瓶中，置暗处。

　　7.5检测方法：将水溶性样品溶液1ml于小试管中，加入1ml奈氏试剂，如含有氟乙酰胺，会出现黄红—澄棕色沉淀，同时做空白对照试验，20分钟即可报告结果。检出限为50μg/ml。注意：氨对本方法有干扰。试剂必须闭光保存。

　　8.磷化锌测定：磷化锌的检测相对复杂些，要先经硝酸银法预试为阳性后，再进行磷和锌的检验，均呈阳性时，可判断磷化锌的存在。一般情况下，可疑物呈深灰色或近似黑色又经酸溶解释放出蒜臭味时，即可考虑可能含有磷化锌的存在。可送实验室做进一步的验证。

　　APHO-E-02-2005亚硝酸盐中毒残留物的快速筛选及食品中残留量的快速检测

　　亚硝酸盐主要指亚硝酸钠，亚硝酸钠为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。外观及滋味都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用，肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高。食入0.3～0.5克的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡。急性中毒原因多为：1.将亚硝酸盐误作食盐、面碱等食用。2.掺杂、使假。3.投毒。4.食用了含有大量亚硝酸盐的蔬菜，尤其是不新鲜的叶类蔬菜。慢性中毒(包括癌变)原因多为：1.饮用含亚硝酸盐量过高的井水。2.食用含有超量亚硝酸盐的肉制品。因此，测定亚硝酸盐的含量是食品安全检测中非常重要的项目。更是食物中毒后主要筛选的项目。

　　1方法原理按照国标GB/T 5009.33做成的速测管，与标准色卡比较定量。

　　2食盐中亚硝酸盐的快速检测及食盐与亚硝酸盐的快速鉴别：用袋内附带小勺取食盐1平勺，加入到检测管中，加入蒸馏水或纯净水至1ml刻度处，盖上盖，将固体部分摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为食盐中亚硝酸盐的含量mg/ kg，(国标规定食盐(精盐)中亚硝酸盐的限量卫生标准应≤2 mg/kg)。当样品出现血红色且有沉淀产生或很快退色变成黄色时，可判定亚硝酸盐含量相当高，或样品本身就是亚硝酸盐。

　　3液体样品测定：直接取澄清液体样品1ml到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，找出与检测管中溶液颜色相同的色阶，该色阶上的数值即为样品中亚硝酸盐的含量mg/L(以NaNO2计)。(牛乳及豆桨也可直接检测，结果不得超过0.25mg/L，有颜色的样品可加入一些活性炭脱色过滤后测定)。

　　4固体或半固体样品测定：取粉碎均匀的样品1.0g或1.0ml至10ml比色管中，加蒸馏水或去离子水(纯净水)至刻度，充分震摇后放置，取上清液(或过滤或离心得到的上清液)1.0ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为样品中亚硝酸盐的含量mg/ kg，L(以NaNO2计)。如果测试结果超出色板上的最高值，可定量稀释后测定，并在计算结果时乘上稀释倍数(如从10ml比色管中取出1.0mL转入另一支10ml比色管中，加水至刻度，从中取1.0mL加入到检测管中测定，测试结果乘上100(倍稀释)即为样品中亚硝酸盐的含量。

　　部分食品中亚硝酸盐的限量标准(以NaNO2计)

　　5说明

　　5.1在生活饮用水的限量卫生标准中，仅有硝酸盐的限定量≤20mg/L，未有亚硝酸盐的指标。当某些还原物质以离子形态存在较多时，可将硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，某些细菌也有这种作用。所以，生活饮用水中常存有亚硝酸盐不能作为测定用稀释液。5.2若显色后颜色很深且有沉淀产生或很快退色变成浅黄色，说明样品中亚硝酸盐含量很高，须加大稀释倍数重新试验，否则会得出错误结论。

　　5.3对于阳性样品应重复操作加以确定。

　　5.4微型超声波溶解、清洗、提取器，可加速试剂溶解和便于对器皿的充分清洗。