使用方法
1. 接种细胞：用胶原酶消化细胞并计数（不建议用胰酶）。转染前 18-24 小时进行细胞的铺板，以便在转染时，贴壁细胞的密度
大约在 80%左右。注：培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。
2. 准备 EZ Trans-DNA 复合物
1）转染前将所有试剂置于室温 10 分钟。下面，以转染 24 孔板培养皿为例，说明转染的具体方法（如果在别的培养器皿中进行转染，各试剂建议使用量见表 1.：
2）将 1 μg 质粒 DNA 稀释到 40 μL 无血清的高糖 DMEM 培养基，用移液枪吹吸 3-4 次。
3）将 3 μL EZ Trans 转染试剂稀释到 40 μL 无血清的高糖 DMEM 培养基，用移液枪吹吸 3-4 次。
注： 无血清的高糖 DMEM 培养基是稀释液， 不能使用含血清的培养基进行 DNA 和 EZ Trans 转染试剂的稀释！因为 EZ Trans-DNA 转染复合物的形成过程不能含有血清。
4）将稀释好的 EZ Trans 转染试剂一次性全部加入到已稀释好的质粒 DNA 中，立即用移液枪吹吸 3-4 次。
注： 此混合的顺序不能反向进行！
5）室温放置 10-15 分钟，以形成 EZ Trans-DNA 复合物。
表1：不同培养体积对应的待转DNA、EZ Trans、稀释液用量
培养器皿 | 培养液体积（mL） | DNA量（μg） | EZ Trans (μL) | 稀释剂(μL) |
48孔板 | 0.3 | 0.5 | 1.5 | 2 × 25 |
24孔板 | 0.5 | 1 | 3 | 2 × 40 |
12孔板 | 0.75 | 1.5 | 4.5 | 2 × 60 |
6孔板 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
35 mm培养皿 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
60 mm 培养皿 | 3 | 6 | 18 | 2 × 250 |
100 mm 培养皿 | 9 | 12 | 36 | 2 × 500 |
3. 转染细胞
1）将上述 80 μL EZ Trans-DNA 转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，让 EZ Trans-DNA
复合物分散均匀。
2）在 CO2 培养箱中 37℃下孵育细胞，转染后 12-18 小时，去除含 EZ Trans-DNA 复合物的培养液。（若细胞形态欠佳，可
在转染 3-5h 后，添加 1/2 体积的包含 30%血清的生长培养基，在转染 12-18 小时后完全去除含 EZ Trans-DNA 复合物的培养液，
用含血清和抗生素的新鲜培养液。）
3）转染后zui快 7h 即可检测到转入基因的表达，可根据需要在 24-48 小时内检测转染效率。
注： 筛选稳定转染细胞株， 可在上述操作后（ 转染细胞 24 小时后） ， 将细胞传代至新鲜的生长培养基中（ 将细胞稀释 10 倍以
上） ， 在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。 在有转染抗性基因相匹配的药物筛选条件下， 约 1～2 周可筛选到耐药性克隆， 在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
运输与保存方法
常温运输，4℃保存，保质期12个月。
使用注意事项
质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过 260 nm 光吸收测定 DNA 浓度，260nm / 280nm 比值确定 DNA
纯度（比值应该在 1.8～2.0 的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮
冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用 GIBCO 或者李记生物的胎牛血清培养细胞。
特别提醒
1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。
如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为 70～80%。
2. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。
3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI 复合物仍能转染细胞，但是 DNA-PEI 复合物必须在无蛋白存在的条
件下形成。
4. 对大多数细胞来而言，每 1μg DNA 使用 3.0 μL EZ Trans 试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每 1 μg DNA 使用
1～4μL 体积线性 PEI 转染试剂进行优化。
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