一步法快检卡法检测粪便中的幽门螺杆菌抗原（HpSA）

2019.11.05

玉芳

致力于为分析测试行业奉献终身

应用范围

HpSA一步法快检卡(ImmuoCard STAT HpSA)，是一种体外准确检测人类粪便中幽门螺杆菌（Helicobacter pylori, Hp）抗原的方法。粪便抗原检测可以用来诊断Hp感染，以及确定Hp根除治疗后Hp是否被根除。常规医疗经验建议采用任何检测方法确定Hp是否被根除都应当在根除治疗结束后4周进行。

有关粪便抗原检测实验的摘要及说明

自从Warren和Marshall首次发现Hp距今已有20余年，Hp是一种影响到全球的非常常见的，而且在医学上具有重要致病性的病原体。Hp是慢性胃炎、消化性溃疡的重要致病因子，并且与胃黏膜淋巴细胞相关组织淋巴瘤及胃腺癌的发病密切相关。

Hp仅限于在人体胃及十二指肠内生长。体内存在Hp的患者可以被分为两类，第一类表现为既没有胃肠道疾病的症状，也没有体征，被认为是“种植者”；另一种表现出胃肠道的症状和体征，被认为是“感染者”。患者是如何成为种植者或者感染者的过程还有待于进一步研究。Hp的传播途径可能有很多种，包括动物、污染的水源、口-口传播等。

Hp感染诊断方法可以分为侵入性（内镜，活检）或者非侵入性（血清学，尿素呼气试验和粪便抗原试验）。侵入性检查是指从上胃肠道取得活检组织，用显微镜进行检测。活检组织也可以进行Hp培养或者采用快速尿素酶试验进行检测。这些检测方法的优点是可以诊断Hp现证感染，并且具有较高的特异性和阳性预测值。而其缺点是侵入性检查具有一定的危险性，患者会感觉不适，并且由于Hp的散在种植会导致活检时漏诊。活检组织培养耗时很多，并且由于操作技术复杂，可能会导致假阴性结果。

尿素呼气试验(UBT)是一种非侵入性检查，其检测Hp产生的具有高度活性的尿素酶。尽管UBT具有高度的敏感性和特异性，但这种方法也存在明显的弱点。UBT检测耗时长，需要特殊的检测设备，患者必须服用同位素标记的试剂。血清学检查，也是非侵入性检查，主要检测血清抗HpIgG抗体，可以用来初筛患者是否有Hp感染，但不能区分患者是既往感染还是现症感染。粪便抗原检测试验已经被广泛验证，并被公认为是一种准确的非侵入性检测方法，既可以用于Hp根除治疗前的诊断，也可以用于判断治疗后Hp是否被根除。Masstricht2共识报告中建议，粪便抗原检测和UBT试验均可用于基层医疗机构的Hp相关疾病诊断。

生物学原理

HpSA免疫检测卡是基于快速层流免疫技术，采用单克隆抗-Hp抗体做为捕捉和检测的抗体。将患者的粪便标本稀释后滴加在加样孔中，在室温条件下，约5分钟后，阅读窗字母T旁边一条粉红色的线即为阳性结果。

标本采集及准备

检测标本应置于空盒内运输，并置于2-8度保存直至检测。标本应当尽快进行检测，其在2-8度只能保存72小时。如果72小时内不能检测，应当在收到标本时立即将标本冷冻，并置于-20度保存直至检测。标本可以冷冻并可二次解冻。

在用吸液管吸取标本之前应当尽可能将粪便混匀。

1．液体或者半固体粪便：每份标本均需使用单独的吸液管（试剂盒提供），吸取粪便至距吸管尖端第二个标记处（100uL）。将吸取的100uL粪便标本加入样品稀释液中。使用同一吸管，轻轻的将粪便标本来回抽吸几次，然后震荡15秒。注意：在吸取半固体粪便标本时一定要小心。少于100uL的粪便标本可能会导致假阴性的结果。多于100uL的粪便标本，由于样品流动性限制，可能会导致检测无效。

2．成形或者固体粪便：用稀释瓶带的涂抹棒，移取一小点（大约5-6mm直径）充分混匀的粪便标本至稀释液。用涂抹棒搅匀，然后震荡15秒。木棒也可用于移取固体粪便标本至稀释液。注意：移取粪便标本过少，或者粪便标本没有在稀释液中充分混匀，可能会导致假阴性结果。请小心的移取粪便标本，既不要少于也不要多于建议的标本量。在检测前，必须通过震荡将标本充分的混匀。多于100uL的粪便标本，由于样品流动性限制，可能会导致检测无效。

操作过程

A．检测

1．检测前将所有检测试剂、标本均置于室温（20-26度）。

2．每份患者的标本用一个试剂卡进行检测。

3．去除检测卡的包装袋，标明患者姓名或者对照。

4．按照说明书中上述有关标本采集和准备的说明，准备样本。

5．标本加入稀释液中后，将稀释液瓶垂直倒置，并轻轻的敲打。用可吸收的纸将稀释液瓶的顶部折断。

6．将样品稀释瓶垂直，滴加4滴样品至检测卡一端的圆孔。如果检测卡没有很容易的将稀释样本吸收，用涂抹棒轻轻的接触样品窗的底部，移去可能影响吸收的固体粪便颗粒。

7．在室温（20-26度）下孵育5分钟。

8．孵育后在1分钟之内读取结果。

B．对照

阳性和阴性对照的设计用于表明所有试剂的反应性、特异性和产生预期结果的能力。

1．分别用ImmunoCard STAT!HpSA检测卡做阳性和阴性对照。并分别标记被检测的阳性和阴性对照。

2．准确地滴加4滴标记的阳性对照试剂。注意：将容器垂直以保证合适的液体大小及速度。请不要让容器尖部接触到样品窗。

3．准确地滴加4滴阴性对照至未使用过的试剂卡。

4．在室温（20-26度）下孵育5分钟。

5．孵育后在1分钟之内读取结果。

结果解释

阴性检测结果：在中央窗口字母C旁边只出现一条蓝色条带（质控线）。即没有Hp抗原或者抗原水平低于检测水平。

阳性检测结果：除了出现蓝色条带（质控线）以外，中央窗口字母T旁边还出现一条可以识别的粉红色条带（检测线）。条带颜色深浅的不同依赖于标本中抗原的浓度，任何可辨别的粉红色，甚至非常浅的颜色，都必须被认为是阳性结果。（阳性检测线表明标本中存在Hp抗原）。

无效检测结果：

1）蓝色条带（质控线）消失，伴有或者没有可视的粉红色条带（检测线）出现。

2）窗口中字母T旁边在6分钟后出现粉红色条带，或者在此部位出现其它颜色（非粉红色）的条带。

3）字母C旁边没有质控线出现。（质控线移位或者消失提示试验无效，可能是由于操作不正确或者试剂已经失效）。

质量控制

ImmunoCard STAT!HpSA检测卡的反应性必须随时用试剂盒提供的阳性和阴性对照试剂来进行验证。不定期对照试验的次数应当根据当地、国家或者国际的规定，或者代理商的规定来决定。

1．对照线出现彩色条带作为阳性对照，提示试验操作正确，样品已经添加且其流动正常，检测试剂在使用时具有活性。

2．对照或检测线周围清晰的背景作为阴性对照。背景模糊使读取的结果无效，提示试剂无活性，样品不合适或者操作不正确。

应得到如前述结果解释中描述的对照结果。如果对照试验不能产生正确的结果，请不要使用该试剂。得不到预期的结果说明试剂失效或者操作不正确。从第一步开始重复对照试验，已确定导致试验失败的原因。

实验的局限性

1．本试验为定性而非定量试验，在报告结果时应当注意阳性线的强度。

2．在应用检测结果时应当结合可获得的患者的临床资料和其他诊断方法。

3．抗生素、质子泵抑制剂和铋剂已知会抑制Hp，在Hp检测（培养、组织学检测、快速尿素酶、呼气试验、抗原检测）前服用这些药物会导致假阴性结果。如果患者在用ImmunoCard STAT!HpSA检测卡检测前两周服用过这些化合物，同样会导致假阴性的结果。在这种情况下，应当让患者在治疗结束2周后再重新留取大便重复检测。两周内服用过这些药物，而用ImmunoCard STAT!HpSA检测卡检测结果阳性的患者，应当认为检测结果是准确的。

4．如果没有在稀释液中加入足量的粪便标本将导致假阴性结果。而加入过量的粪便由于限制标本的流动性将导致无效结果。

5．过长时间的孵育可能会导致假阳性结果。孵育温度过低或者时间过短可能会导致假阴性结果。

6．水样便的操作特点还尚未确定。没有或只含有极少固体物质的水样便可能会导致假阴性的结果。

预测价值

Hp感染流行病学研究表明Hp感染波及全球。Hp感染引起的胃炎与年龄、种族背景、家庭规模和社会经济阶层有关。不同人群Hp的感染率自20%-90%不等。被诊断十二指肠溃疡的患者，无论在那个年龄组其Hp感染率均接近80%。最新推荐的Hp根除治疗方案的根除率可达到75%-90%。

ImmunoCard STAT!HpSA检测卡可以通过人类的粪便确诊Hp现症感染。任何一个实验室都可以用来预测指定人群的Hp感染率。其阳性率不同，可能与地域，标本采集、处理和运送的方法，试验人员，所研究患者人群公共卫生环境的不同有关。

敏感性分析

本试剂最低限可检测到浓度为64ng/mL经超声粉碎制备的TV1970Hp抗原。这一低限不随粪便形态（固态-半固态）改变。

重复性

ImmunoCard STAT!HpSA检测卡的重复性由已知的阴性（n=5）和阳性（n=5）标本确定，这些标本被随机编号以免被识别。五个阳性标本中有两个接近检测试剂的诊断低限。分别用3个不同的试剂盒连续3天对标本重复进行检测。所有检测结果均100%准确。

影响检测结果的物质

当粪便中存在低于以下浓度的物质时，对检测结果没有影响。