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活细胞表面抗原的荧光染色(直接免疫荧光)
活细胞表面抗原的荧光染色(间接免疫荧光)
细胞 初始抗体
PBS 溶液 叠氮化钠
1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液,轻摇,收获细胞。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA 或热的灭活血清洗细胞。3. 计数细胞,每个样品的最小浓度为 1X106/ml。4. 将样品等分为 50 μl 小体积的含 0.1% 叠氮化钠和 1% 热的灭活血清或 1% 的 PBS 溶液。5. 加合适滴度的初始抗体,用系列稀释确定合适滴度范围。6. 在冰上孵育细胞 30 分钟。7. 在含叠氮化物和 BSA 或热的灭活血清的 4 ml PBS 中洗细胞。8. 1000 g 离心细胞 5 分钟。9. 在相近体积的含 0.1% 叠氮化物和 1% BSA 中重悬细胞,终浓度为 1X106~5X106 /ml。