标记单层培养细胞
标记悬浮培养的HeLa细胞
实验材料 | HeLa 细胞 |
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试剂、试剂盒 | FCS 磷酸盐 |
仪器、耗材 | 无磷酸培养基 |
实验步骤 | 1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。 2. 倒掉完全培养基,加入新鲜的无磷酸培养基,培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。 3. 换新鲜的无磷酸培养基,并加 32P 磷酸盐至 20 μCi/ml,继续培养 16 小时。 4. 估算同位素的摄取量: (1) 加入同位素,混匀后立即吸出 5 μl 培养基于一小离心管,冰浴。 (2) 培养结束后再取 5 μl 培养基。 (3) 通过测定温育前后培养基活性差来估算放射活性。 5. 提取并分析 RNA。 |