试剂盒选用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。往预先包被人性别决议区Y框蛋白9(SOX9)捕获抗体的包被微孔中，依次参加标本、规范品、HRP标记的检测抗体，通过温育并完全洗刷。

免责声明

1. 试剂盒仅供研讨运用，不得用于临床实验或人体实验，否则所发生的一切结果，由实验者承当，本公司概不负责。

2. 严厉依照说明书操作，实验者违背说明书操作，结果由实验者承当。

操作过程

1、加酶：每孔参加酶标试剂50μl，空白孔在外。

2、温育：操作同3。

3、洗刷：操作同5。

4、显色：每孔先参加显色剂A50μl，再参加显色剂B50μl，悄悄震动混匀，37℃避光显色15分钟。

5、停止：每孔加停止液50μl，停止反应（此时蓝色立转黄色）。

6、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。

7、加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其他各步操作相同）、规范孔、待测样品孔。在酶标包被板上规范品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl然后再加待测样品10μl（样品终究稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，悄悄晃动混匀。

8、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

9、配液：将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用

10、洗刷：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。