猪流行性腹泻病毒抗体酶联免疫分析试剂盒使用说明

使用目的：

本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中流行性腹泻病毒抗体（  PEDV-Ab）含量。

猪流行性腹泻病毒抗体（PEDV-Ab）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理：

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪流行性腹泻病毒抗体（  PEDV-Ab）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入流行性腹泻病毒抗体（PEDV-Ab），再与 HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的流行性腹泻病毒抗体（PEDV-Ab）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪流行性腹泻病毒抗体（PEDV-Ab）浓度。

5号标准品

4号标准品

3号标准品

2号标准品

1号标准品

150μl的原倍标准品加入  150μl标准品稀释液

150μl的  5号标准品加入  150μl标准品稀释液

150μl的  4号标准品加入  150μl标准品稀释液

150μl的  3号标准品加入  150μl标准品稀释液

150μl的  2号标准品加入  150μl标准品稀释液

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，
然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。
计算以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与  OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。