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胰岛素受体-β抗体的主要使用方法

2019.12.19
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184****5725

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胰岛素是全身代谢的主要调节激素之一。这种激素的生物学作用包括碳水化合物、蛋白质和脂质代谢的整合。胰岛素增强葡萄糖、氨基酸和某些离子的膜转运。它还促进糖原储存,甘油三酯的形成和蛋白质和核酸的合成。免疫细胞化学研究在胰岛B细胞中定位胰岛素。胰岛素缺乏导致糖尿病,是一般人群发病率和死亡率的主要原因之一。胰岛素也存在于B细胞来源的肿瘤中,如胰岛素瘤。

功能:
胰岛素降低血糖浓度。它增加了细胞对单糖、氨基酸和脂肪酸的渗透性。它加速糖酵解、戊糖磷酸循环和肝糖原合成。
 胰岛素受体-β抗体 主要操作步骤如下:
A.a. 在进行标记之前,先选用截流分子量为20000-50000的凝胶,制备1ml凝胶柱,然后分别用10倍体积的1%BSA/PBS/0.02%叠氮钠和PBS洗涤柱体,封住柱下口,备用。
B. b加入10ug纯化单抗至含有25ul 2.5mol/L磷酸钠(PH7.5)的1.5ml指形管内。随后,加入500uCi Na125I混匀。
C. c 加入25ul新配制的2mg/ml氯胺T。室温放置60秒。再加入50ul氯胺T终止液(含2.4mg/ml偏重亚钠,10mg/ml酪氨酸,10%甘油和0.1%环乙烷酰二甲苯的PBS  胰岛素受体-β抗体 标记抗体大约在第二至第四管出现。无害化处理柱子和非单抗标记部分。e. 将标记单抗保存于4℃可使用6周时间。
D、d 生物合成法标记将杂交瘤细胞培养在含有放射性前体的培养基中,随着抗体分子的合成、组装,同位素会标记在抗体分子的初级氨基酸链上,本方法不会导致抗体活性的丧失。
检测方法:荧光或着色沉淀,荧光标记物用特殊波长的光激发时发射出可见光。


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