色谱仪检测器概述（十二）

第十四节 荧光检测器

液相色谱仪荧光检测器（FLD）是基于具有荧光的物质在一定条件下发射荧光的强度与物质的浓度成正比进行检测。

一、结构：

FLD由光源、选择激发波长用的单色器、样品流通池、选择发射波长的单色器和光电检测器等组成。

二、工作机理：

当某些溶液受紫外光照射后，能吸收紫外光而处于不稳定的激发状态，紧接着辐射出比紫外光波长更长的光线即荧光。在被测溶质浓度较低时，溶质受激发而发生的荧光强度与被测溶质的浓度成正比。

由FLD光源发出的光经激发光单色器后，得到所需要的激发光波长，激发光通过样品流通池，一部分光线被荧光物质吸收，荧光物质激发后，向四面八方发射荧光。为了消除入射光与散射光的影响，一般取与激发光成直角的方向测量荧光（直角光路）。荧光至发射光单色器分光后，单一波长的发射光由光电检测器接收。

三、特点：

1、优点：

（1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一。检测下限为10ˉ¹²～10ˉ¹⁴g/mL，比UVD高100倍，可用于痕量分析。

（2）选择性好，产生荧光的必要条件：

1）物质分子中具有能吸收激发光能量的吸收带，即物质分子必须具有一定的吸收结构。

2）物质分子吸收激发光能量后荧光效率高。

（3）对温度和流量不敏感。当所选用的流动相溶剂不发射荧光时，可用于梯度洗脱。

（4）所需样品量很小，特别适合药物和生物化学样品等检测。

（5）受外界条件的影响小。

2、缺点：

（1）定量分析时线性范围较窄，不宜作为一般的检测器使用。

（2）测定中不能使用可熄灭、抑制和吸收荧光的溶剂作流动相。

（3）对不能直接产生荧光的物质，要使用色谱柱后衍生技术，操作比较复杂。

四、应用：

1、适用于具有荧光的有机化合物的检测。共轭和芳香族化合物最容易有荧光现象。氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物和某些代谢药物可用FLD检测。

2、有的有机物虽然本身不产生荧光，但可与发荧光物质反应衍生化后检测。

第十五节 化学发光检测器

化学发光检测器是近年来发展起来的一种快速、灵敏的新型液相。

一、工作原理：

某些物质在常温下进行化学反应，生成处于激发态反应中间体或反应产物，当它们从激发态返回基态时发射出光子。由于物质激发态的能量是来自化学反应，故称为化学发光。当被测组分从液相色谱柱中洗脱出来后，立即与适当的化学发光试剂混合，引起化学反应，导致发光物质产生辐射，其光强度与该物质的浓度成正比。

化学发光检测器不需要光源，也不需要复杂的光学系统，只要有恒流泵将化学发光试剂以一定的流速泵入混合器中，使之与色谱柱流出物迅速、均匀地混合，产生化学发光，通过光电倍增管将光信号变成电信号，进行检测。

二、特点：

1、检测下限可达10ˉ¹²g。

2、线性范围宽。

3、检测快速。

4、结构简单，价廉。