正确配置高效液相色谱仪流动相的四个要点

高效液相色谱仪的分离原理主要取决于流动相和固定相对样品的吸附和解吸，因此流动相的正确配置对实验数据和分离效果具有重要意义。

一、流动相配置注意事项

通常，溶剂按体积比（v/v）或重量比（w/w）混合。溶液的体积由于温度而变化，使得流动相按重量比混合，样品测量的重复性好，但操作复杂，通常在体积混合中。

体积混合有三种方式如50%乙腈水溶液：

方法（1）：用量筒量取500ml乙腈，再量取500ml乙腈。把这两种液体在瓶子里摇匀。

方法（2）：先将500 ml乙腈放入1L容量瓶中，再用水定容。

方法（3）：取500ml水置1L容量瓶中用乙腈定容。

三种配置都有不同的流动相组成，保留时间不一样，不考虑其他因素..通常，建议使用方法（1）来配置移动阶段。

二、高效液相色谱仪对试剂的要求

试剂（如甲醇和乙腈）必须为色谱级，其他试剂应作为色谱级，试剂标签用色谱级或HPLC进行标记。水为超纯水或水质有保障的纯水可直接购买。

三、调节流动相pH值

当弱酸竞争(7)或弱碱(7)通过反相色谱法竞争(8)样品时，调节流动相的pH值以抑制样品组分的解离，增加固定相中组分的保留，并且峰形状技术被改进为反向离子抑制技术。.

（1）对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的K值越大。当pH值远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；在分析弱酸性样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，通常为50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%乙酸盐溶液。

（2）对于弱碱情况相反在弱碱样品分析中，流动相中通常加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液在流动相中加入有机胺可以减少碱性溶质与残留硅醇基团之间的强相互作用减少或消除峰值尾迹现象因此，在这种情况下，有机胺（如三乙胺）也被称为尾部还原剂或尾部去除剂。

四、含缓冲盐流动相的配制

在缓冲盐中使用的盐试剂也尽可能使用色谱级纯度称重样品要准确以满足要求，选择合适的比例平衡并在日常使用前对天平进行校正按要求配置后必须用0.45μm或0.22μm膜过滤超声脱气20分钟以上,注：应以新形式使用缓冲盐。