高效液相色谱仪的分离原理主要取决于流动相和固定相的吸附和解吸。
流动相的正确配置对实验数据和分离效果至关重要。
首先，流动相构型中应注意的问题-一般情况下，溶剂的混合是根据体积比(V≤V)或重量比(W≤W)进行的。
高效液相色谱仪的色谱法所需的甲醇、乙腈等试剂必须为色谱纯级。其他试剂也应尽可能为色谱纯级。试剂标签上应标明色谱等级或高效液相色谱字样,水必须是超纯水或直接购买质量保证纯净水.
当高效液相色谱仪反相色谱法将流动相的pH值调整为分离弱酸（3<pka<7）或弱碱（7<pka<8）时，通过调整流动相的pH值来抑制样品组分的分离，增加了组分在固定相上的保留，提高了样品的稳定性。d采用反相离子抑制技术改善了峰形。
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