一、原理
用C18固相萃取柱提取500ml水样，用甲醇洗脱，提取液浓缩至1ml样品经c18柱在配备紫外检测器的高效液相色谱仪上分离检测。
二、试剂和材料
2.1试剂水，纯水，不超过检测限的三分之一或检测限的三分之一。
2.2乙腈，高效液相色谱级。
2.3 甲醇，HPLC 级。
2.4 丙酮，HPLC 级。
2.5mM磷酸盐缓冲液用于高效液相色谱流动相取0.5m磷酸钾贮备液（3.5.1）和0.5m磷酸贮备液（3.5.2）各100ml用试剂水稀释至4L溶液的pH值应约为2.4。应使用pH计测量该值。备份用0.45m尼龙膜过滤。
2.5.1磷酸钾原液（0.5m）称取68g KH 2po4用1L试剂水溶解。
2.5.2磷酸盐储备溶液（0.5M）34.0mL磷酸（85%，HPLC级）用试剂水稀释至1L。
2.6样品保护剂硫酸铜CuSO4·5H2O分析纯用作杀菌剂防止微生物降解受试物。
2.7 标准样品溶液
2.7.1除蝶入和除虫溶液外，待试验对象的储备标准溶液与甲醇溶解。赛蒲隆和二氟苯脲在甲醇中的溶解度有限，溶于丙酮。只要该方法中规定的样品体积尽可能小，丙酮将不会干扰分析。储备溶液可在-10℃下储存6个月。
2.7.1.1准确地称重被测化合物25-35毫克(精确至0.1毫克)，可溶解在甲醇中，放入5ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
2.7.1.2赛龙和二氟苯虫隆应溶解在丙酮中准确地称取纯物质（至0.1mg）10-12mg，置于10mL容量瓶中..环丙孕酮难溶，但10mg纯品应溶于10ml丙酮中超声可有助于溶解。
2.7.2从储备标准溶液中稀释分析用标准样品（浓度200μg/ml和10μg/ml）将原料标准溶液稀释到200微克/毫升的溶液中，加入适量的甲醇如需10μg/ml标准溶液，可用200μg/ml标准溶液进一步稀释标准溶液可用于校正标准样品，并可在-10°C下稳定储存3个月。
2.8 固相提取用材料
2.8.1固相萃取柱6ml填充500mg（40μm直径）硅胶基质C18填料。
2.8.2具有流量/真空控制功能的真空抽取装置。使用导销或阀门以避免交叉污染。
2.8.3离心管、15mL或适用于洗脱液的其他容器。
2.8.4萃取浓缩系统1在40℃水浴中加热15ml试管，同时用氮气吹扫至一定体积。
三、仪器
3.1高效液相色谱仪带紫外检测器或光电二极管阵列检测器。
3.2优选柱为4.6×150 m m，3.5μm DP C18。
3.3确认色谱柱、4.6或150mm、5或m氰化物柱必须具有与优选色谱柱不同的选择性和洗脱顺序。
四、分析步骤
4.1 固相提取步骤
4.1.1 小柱活化
一旦小柱被激活，在样品装载完成之前，它应该保持在渗透状态，并且不能被干燥。否则，回收率就会降低。用5毫升甲醇渗透柱填料约30秒(暂时停止真空)并激活它。在此期间，甲醇水平不得低于填料上部。甲醇活化后，用两部分5ml试剂平衡柱与水。小心控制真空度，保持填料湿润。在取样前，在柱内加入5ml左右的试剂水。
4.1.2 上样
打开真空，让样品溶液以20毫升/分钟（负9-10升汞柱）的流速通过色谱柱。注：在所有样品通过小柱之前，小柱不能干燥所有样品通过色谱柱后，真空（负10-15，Hg）约15分钟，然后释放真空。
4.1.3 小柱洗脱
柱内加入3ml甲醇，使柱完全渗透。排空真空，让塔填料在甲醇中浸泡30秒。打开真空，并用甲醇在低真空(minus2-4，Hg)下从柱子上洗脱样品，并将洗脱溶液滴加到收集管中。用2毫升甲醇重复。第三次用1ml甲醇洗脱。
4.1.4 洗脱液浓缩
洗脱液在40℃以上的水浴中浓缩至0.5ml，并用氮气气流吹扫。转至容量为1毫升的容量瓶用少量甲醇清洗收集管。
4.2 高效液相色谱仪分析
4.2.1优选分析柱：C18，4.6-150毫米，3.5mC18柱。
条件：溶剂A:25 mm磷酸缓冲液；溶剂B:乙腈坡度变化：
检测波长：245nm。在下一次注射前平衡15分钟。
4.2.2确认柱：4.6×150 m m，5μm氰基固定相柱。
条件：溶剂A：25 mm磷酸盐缓冲液，溶剂B：乙腈坡度变化：
平衡时间：15分钟检测波长：240nm。
图 1: C18 色谱柱：分离结果
图２: 确认柱-氰基柱：分离结果
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