高效液相色谱法测定食品中防腐剂

1)测定原理

试样加温除去二氧化碳和乙醇,调节H至近中性,过滤后进高效液相色谱仪,经反相色谱分离后,根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

2)试剂

①氨水    1+1。

②甲醇    经0.5μm滤膜过滤。

③碳酸氢钠溶液    20g/L。

④乙酸铵溶液   0.02mol/L。称取1.54g乙酸铵,加水至1000mL溶解,经0.45μm滤膜过滤。

⑤苯甲酸标准贮备溶液    准确称取0.1000g苯甲酸,加5mL碳酸氢钠溶液(20g/L),加热溶解,移入100mL容量瓶中,加水定容至刻度,作为储备溶液,此溶液每毫升含苯甲酸1mg。

⑥苯甲酸标准使用溶液    吸取苯甲酸标准储备溶液10.0mL,放入100mL容量瓶中,加水至刻度,经0.45μm滤膜过滤,该溶液每毫升相当于0.10mg的苯甲酸。

3)仪器

高效液相色谱仪(带紫外检测器)。

4)操作方法

(1)试样处理

①果汁类    称取5.00～10.0g试样,用氨水(1+1)调pH约7,加水定容至适当的体积,离心沉淀,上清液经0.45μm滤膜过滤。

②汽水称取5.00～10.0g试样,放入小烧杯中,微温搅拌除去二氧化碳,用氨水(1+1)调pH约7。加水定容至10～20mL,经0.45m滤膜过滤。

③配制酒类称取10.0g试样,放入小烧杯中水浴加热除去乙醇,用氨水(1+1)调PH约7,加水定容至适当体积,经0.45m滤膜过滤。

(2)高效液相色谱参考条件

①柱    WG-C₁₈4.6mm×250mm,10μm不锈钢柱。

②流动相    甲醇乙酸铵溶液(0.02mol/L)(5+95)。

③流速    1mL/min。

④进样量    10μL。

⑤检测器    紫外检测器,波长230nm,0.2AUFS。

(3)测定    根据保留时间定性,外标峰面积法定量。

5)结果计算

式中    X——试样中苯甲酸含量,g/kg;

          m^'——进样体积中苯甲酸的质量,mg;

          V₂——进样体积,mL;

          V₁——试样稀释液总体积,mL;

          m——试样质量,g。

6)讨论

①被测溶液pH对测定和色谱柱使用寿命均有影响,pH<8或pH<2时影响被测组分的保留时间,对仪器有腐蚀作用,以中性为宜。

②测定苯甲酸、山梨酸也可以用 MicroPAKCN104mm×300mm柱,流动相可用甲醇水。

③苯甲酸回收率为90%～110%,山梨酸回收率为90%～95%。