根据分离机理的不同，高效液相色谱可分为液-固吸附色谱、液-液分配色谱（正、反相）、离子交换色谱、离子对色谱和分子排阻色谱。
1.液固色谱使用固体吸附剂，色谱柱上分离组分的原理是根据固定相对组分的不同吸附力进行分离 分离过程是吸附-解吸平衡过程。 常用的吸附剂是粒径为5-10μ m的硅胶或氧化铝 适用于分子量为200~1000的组分分离，其中大部分用于非离子化合物。离子化合物容易拖尾 它通常用于分离异构体。
2.液-液相色谱
使用固定相，该固定相通过在载体表面涂覆特定的液体物质或化学结合到载体表面而形成分离原理是根据分离出的组分在流动相和固定相中的不同溶解度进行分离分离过程是一个分配平衡过程。
涂层固定化具有相应的良好惯性；流动相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从载体表面的损失。不同批次的温度变化和流动相差异通常会导致色谱柱发生变化。此外，流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集变得复杂。因为涂覆的固定相对于避免静止液体的损失是困难的，所以现在很少使用它目前主要采用化学键合固定相，如c18、c8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。
液相色谱法可根据固定相和流动相的极性分为正相色谱法（NPC）和反相高效液相色谱法。
正相色谱
极性固定相（如聚乙二醇、氨基和腈键合相）和流动相是相对非极性的疏水性溶剂（烷烃，如正己烷和环己烷）经常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃和氯仿来调节组分的保留时间常用于分离中等极性和强极性的化合物(如酚类，胺类，羰基和氨基酸等)
3.反相色谱
通常使用非极性固定相（如C18和C8)流动相是水或缓冲溶液。甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等水溶性有机溶剂常被加入以调节保留时间。 适用于分离非极性和极性较小的化合物 粉末冶金广泛应用于现代液相色谱据统计占高效液相色谱总应用的80％左右。
随着柱填料的迅速发展反相色谱的应用逐渐扩大并已应用于一些无机或易离解样品的分析为了控制分析过程中样品的解离，通常使用缓冲溶液来控制流动相的酸碱度。 然而，应该注意的是，C18和C8所用的酸碱值通常为2.5~7.5（2~8），过高的酸碱值会溶解硅胶，过低的酸碱值会导致键合的烷基基团脱落。 据报道，新的商业塔可在1.5 ~ 10的酸碱度范围内操作。
正相色谱和反相色谱对比表
正相色谱反相色谱
固定相极性高~中~低
流动相极性低~中~高
组分洗脱顺序极性小洗脱极性先大洗脱第一
从上表可以看出，当极性为介质时，正相色谱与反相色谱(如氨基键合固定相)之间没有明显的边界。
4.离子交换色谱
固定相是一种离子交换树脂，通常是由苯乙烯和二乙烯基交联形成的聚合物骨架。羧基、磺酸基（称为阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）附着在表面末端的芳环上。色谱柱上分离组分的分离原理是树脂上的离子化离子与流动相中电荷相同的离子和被测组分的离子可逆交换，并根据每个离子的不同电荷吸引度进行分离。离子交换组。
缓冲液通常用作离子交换层析的流动相分离组分在离子交换柱中的保留时间不仅与组分离子和树脂上离子交换基团之间的相互作用强度有关，还受流动相的酸碱度和离子强度的影响 酸碱度可以改变化合物的解离度，从而影响其与固定相的相互作用。 如果流动相中盐的浓度很大，离子强度将很高，这不利于样品的解离，导致样品更快流出。
5.离子对色谱
也称为偶离子色谱，是液-液色谱的一个分支该方法包括:根据被测组分离子和离子对试剂离子形成中性离子对化合物，增加在非极性固定相中的溶解度，从而提高中性离子对化合物的分离效果 主要用于分析离子强度高的酸碱物质。
用于分析碱性物质的常用离子对试剂是烷基磺酸盐如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等此外高氯酸和三氟乙酸可以与各种碱性样品形成强离子对。
四丁基季胺盐，例如四丁基胺和四丁基胺磷酸盐，通常用于酸性物质的分析。
ODS柱（即C18）通常用于离子对色谱。流动相为甲醇-水或乙腈-水，水中加入3 ~ 10[/小时/]毫摩尔/升离子对试剂，在一定的酸碱度范围内分离被测组分的保留时间与离子对性质浓度流动相组成酸碱度和离子强度有关。
6.排阻色谱
固定相是具有一定孔径的多孔填料，流动相是能够溶解样品的溶剂 小分子量化合物可以长时间进入孔隙。大分子量化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。 它利用分子筛对不同分子量组分排斥能力的差异来完成分离通常用于分离大分子化合物如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。
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