关于分离外泌体的最佳方法，仍然众说纷纭，尚无定论。在诸多方法中，尺寸排除色谱法（size exclusion chromatography，SEC)因可分离得到高纯度和浓缩的样本，被广泛用来分离生物液体样本。SEC可通过离心或重力流进行。在重力流的作用下，一个样本可以收集到多组分离组分，并可分析得到高纯度外泌体。
技术介绍
Exo-spin™技术结合了沉淀法和SEC法，沉淀剂可以从样本中将外泌体富集出来，但是只使用沉淀剂方法，会导致外泌体和杂蛋白等杂质一起沉降，结合SEC纯化管柱，可去除蛋白等杂质，大大提高了外泌体纯度。
1.SEC原理介绍
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SEC方法是一种根据尺寸大小分离溶液中颗粒的方法。色谱柱中装有稳定的聚合物珠（树脂），形成多孔基质。当将含有外泌体的溶液添加到SEC色谱柱中时，较小的颗粒将被捕获在孔中，而较大的颗粒则不会进入孔中并先洗脱。因此，不同阶段的洗脱液中会包含不同大小的颗粒，首先是大颗粒，其次是小颗粒。SEC方法是获得高纯度样品的理想方法，可以将外泌体与其他非外泌体成分分开，同时适用于大体积和小体积的起始样本。 |
2.Exo-spin技术操作步骤
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1. 离心去除细胞和细胞碎片 2. 沉淀含有外泌体的部分（血液样本（血浆和血清）无需此步骤） 3. 将含外泌体的沉淀物添加到Exo-spin™mini-HD色谱柱中，以进行SEC纯化。 |
从人血清提取外泌体效果验证
方法：
将100 µl人血清样品添加到Exo-spin™mini-HD色谱柱中，然后添加100 µl PBS，并重复添加23次200 µl PBS，直至收集24次200 µl分离组分，分别检测24个组分的外泌体颗粒（下图蓝色曲线）和蛋白浓度（下图灰色曲线）。
结果分析：
使用Exo-spin™mini-HD的人血清分离谱
分离组分分析：
组分1-5，Exo-spin™mini-HD色谱柱未洗脱出外泌体，组分6和7包含外泌体，其中外泌体浓度在组分7中达到峰值，而且这两个组分中的蛋白质含量仍偏低。不需要的杂蛋白体积较小，则在随后洗出。
总结：
使用Exo-spin™mini-HD可以高效分离外泌体，用于分离从1到75 ml（细胞培养基，尿液，唾液，CSF和任何其他低蛋白生物液体）的起始样品和从1到150 µl血液样品（血清/血浆）。
Exo-spin™mini-HD是通过重力流的方式收获外泌体，因此也无需特殊设备，操作更简单。
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