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电泳法分离蛋白质原理是什么

2020.2.20
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chloe

随遇而安

  电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其含量(%)的方法。电泳法包括纸电泳法、醋酸纤维素薄膜电泳法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法等。

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  电泳不但应用于蛋白质的分离与含量的测定,而且在免疫学实验中有许多新的应用。例如:诊断乙型肝炎的乙型肝炎抗原(HBAg)的电泳测定>诊断原发性肝癌的甲胎蛋白(AFP>的电泳测定等等。

  一般临床检验室对电泳的应用,主要还是蛋白质的检定。以下就谈谈蛋甶质电泳的原理。蛋白质是由氨基酸组成的,所以血淸中各种蛋白质都和氨基酸一样具有酸性基团(-COOH),或硷性基团(-NH2)。

  若溶液的PH值低于等电点,则这个蛋白质带生电荷,在电场中向负极移动。反之,溶液的PH值大于等电点,则这个蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动。蛋白质两性离各种蛋白质都有它的等电点。人血浆蛋白质的等电点如表46。其等电点都低于PH7.5,所以在pH比它们等电点高的缓冲液中(PH8.6时),蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动。

  一蛋白质在电场中移动的速度,是和它本身所带的电量、电场的强度和运动中所受到的阻力有关。因此,在同一条件下各种蛋白质的移动速度不同。例如人血淸中各种蛋白质等电点不同,在同一PH溶液中移动速度不同,故电泳时能在电泳支持物(如滤纸或琼脂等)上区分出各个蛋白质。经染色后,得到鲜明的色带图谱。将各条色带剪下分别溶于脱色剂中,再进行比色测定,就能求出各种蛋白质占总蛋白量的百分率。

  

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