美国卫生部（DHHS）及物质滥用和精神健康服务管理局（SAMHSA）制订了美国联邦药物测试项目中关于尿液中各项药物测定的强制指南。该指南规定，在尿液样品药品测试报告阳性结果之前，需要实验室进行初始药物测定和药物确证两步分析测定。本文建立了符合美国联邦药物测试项目要求的尿液中类交感胺类药物的分析方法。
根据DHHS与SAMHSA制订的尿液中各项药物测定的强制指南规定：初始药物测定通过免疫分析筛查5个药物类别（如安非他明、可卡因、鸦片、苯环利定和大麻），免疫筛查法包括放射免疫检测（RIA）及酶免疫检测（EIA，EMIT）等。免疫筛查样品测定结果为阳性需要进一步的色谱分离确证和质谱鉴定。SAMHSA规定5种氨基药物 （AMP、MAMP、MDA、MDMA和 MDEA）分析方法定量限近似为250ng/ml。
实验概述
确证分析尿液中的药物主要需进行以下7个步骤：
在尿液样品中加入氘代内标；
调节尿液的pH值；
水解尿液（仅鸦片和大麻）；
固相萃取（SPE）尿液中的药物，蒸发至干；
衍生萃取物（PCP除外）蒸发至干；
有机溶剂复溶；
注入1~3μl至气相色谱质谱联用仪，使用3离子比例的报告鉴定及定量测定。
图1. HFBA衍生工具的安非他明和甲基安非他明（100ng/ml尿液）色谱图。
玻璃器皿
所有的玻璃器皿，包括自动进样瓶和小体积的进样瓶内插管必须进行硅烷化处理，以防止样品吸附。将所有的玻璃器皿在10%DMDCS/甲苯溶液中浸泡10min，依次采用甲醇、正己烷清洗，然后风干。
实验试剂
PFPA=PFAA=五氟丙酸酐Campbell Scientific （Rockton，1L）；
HFBA=七氟酪酸酐Campbell Scientific （Rockton，1L）；
TFAA=三氟乙酸酐Campbell Scientific （Rockton，1L）；
醋酸100mM=2.86ml冰醋酸加入500ml的水中；
磷酸缓冲盐100mM pH6=1.7g Na2HPO4+12.14g Na2HPO4加入1L水中溶解，pH偏高用100mM NaH2PO4调节，pH偏低则用100mM Na2HPO4调节。
二氯甲烷/异丙醇/氨水（78：20：2） 萃取溶剂=40ml IP-OH+4ml conNH4OH+ 156ml MeCl2，每天新配。
药物标准品及氘代内标为Cerillant （Round Rock，TX），内标物：d5或d8-安非他明，d5或者d8-甲基苯丙胺。
仪器设备
气相色谱：PerkinElmer Clarus 680气相色谱；
进样口： 毛细管注射器使用压力脉冲无分流进样，250℃；
进样口衬管：SiltekTM带有玻璃毛（Cat. No.N6502010）；
气相色谱柱： Elite-5（5%苯基/ 9 5%甲基硅烷）12m×0.2mm×0.33μm（Cat. No. N9316110），载气He流速2.0ml/min；
气相炉温：60℃保持1min，再以40℃/min升温至300℃，保持1min，总计8min；
压力脉冲无分流进样：该程序是在进样过程中增加进样口压力，从而使更多的样品以很窄的带宽进入色谱柱，然后减少载气的流速至色谱的正常操作线速度。程序的时间设置如下：
在-0.71min，CAR2设置为5ml/min（进样之前增加压力）；-0.7min SPL2设置为0（无分流进样）；
0.7min CAR2设置为2ml/min（进样后正常流速）；0.8min设置SPL2为50（进样后，打开分流阀）。
质谱：PerkinElmer Clarus SQ 8 MS， 270L/sec分子涡轮泵，EI模式。选择离子监测（SIM）模式采集数据，每个离子采集20~50ms。主要离子用于鉴定和定量分析，另外两个离子用于确证及鉴定。3个离子色谱峰的顶点必须在标准品扫描的保留时间±2之内，离子比例与标准品的离子比例相差不超过20%。氘代的内标可以仅选择两个离子：一个主要离子和一个确证离子。
首页
