图2. PFPA离子的质量色谱图叠加。
固相萃取
采用高分子树脂的固相萃取（SPE）柱从尿液基体中萃取药物，当尿液样品通过树脂柱时，药物被保留，清洗树脂柱床除去盐及其他的干扰物。使用较强的溶剂将药物从树脂柱床中淋洗下来，以完成样品的净化。萃取柱使用Supra Clean SPE柱。
实验步骤
萃取程序
1~2ml尿液样品+内标+2ml 100mM磷酸缓冲盐（pH6）。
SPE柱萃取
先后用3ml甲醇、3ml水分别淋洗萃取柱，然后加入1ml磷酸缓冲盐（pH6）。
加入样品，分别使用3ml水，1ml 100mM的乙酸乙酯，1ml甲醇清洗。
利用3ml二氯甲烷/异丙醇/氨水（78：20：2）淋洗萃取柱，收集萃取溶液至离心管中。
小于50℃蒸发至干，50μl衍生化试剂复溶，N2氛围，盖紧，混匀，70℃加热20min，小于50℃蒸发至干。100μl乙酸乙酯复溶，转移至自动进样瓶的内衬管中，进样1μl。
有很多衍生化试剂可以使用，每种产生不同的离子，主要衍生化试剂有：PFPA， HFBA， TFAA等。
PFPA的SIM离子
Amp：190，118，91；
d5-Amp：194，123；
d8-Amp： 193，126；
RT：3.11min；
Mamp：204，160，118；
d5-Mamp： 208，163
d8-Mamp：211，163；
RT：3.49min。
HFBA的SIM离子
Amp：118，240，91；
d5-Amp：244，123；
d8-Amp：243，126；
RT：3.29min；
Mamp：118，210，254；
d5-Mamp：258，213；
d8-Mamp：261， 213；
RT： 3.59min。
TFAA的SIM离子
Amp： 118，140，91；
d5-Amp： 144，123；
d8-Amp： 143，126；
RT： 3.10min；
Mamp： 154，118，110；
d5-Mamp：158，113；
d8-Mamp： 161，113；
RT：3.48min。
注意
PFPA蒸发致干较HFBA容易，50℃时可在5min之内蒸发；HFBA/TFAA以1：9稀释在己烷里能蒸发得更快；若有羟基存在，PFPA将会溅射，因此衍生前样品应该干燥且没有醇存在。
校准范围
方法确证近似水平=250ng/ml。10%（25ng/ml），40%（100ng/ml），100%（250ng/ml），125%（312.5ng/ml），500%（1250ng/ml）和1000%（2500ng/ml）。
实验结果
图1为HFBA衍生工具的安非他明和甲基安非他明（100ng/ml尿液）色谱图，图2为PFPA离子的质量色谱图叠加。定量限：2ml尿液25ng/ml；检测限：2ml尿液＜2.5ng/ml；线性相关系数（R2）＞0.999。
小结
本文建立了符合美国联邦药物测试项目要求的尿液中安非他明的分析方法。法医和临床实验室可以应用同样的方法测定毒理学样本中非限制药物。通过使用较短的气相色谱柱，较快的流速进入质谱，较快的气相色谱炉温降温速度及自动进样器的预清洗程序，从而提高了样品的通量。Perkinelmer公司Clarus SQ 8 GC/MS的操作系统在SIM扫描模式时，给出了灵敏可靠的色谱数据。本实验还应用了TurboMass GC/MS软件包括3离子比例确证的计算及简单易懂的数据报告模板。
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